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目的:该实验主要是通过克隆形成能力和致瘤能力两方面来研究非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞系和小细胞肺癌（small cell lungcancer,SCLC）H446细胞系中肿瘤始发细胞的比例。方法:采用有限稀释法将A549和H446细胞稀释至10个/ml,100ul/孔种96孔板,1周后显微镜下检测细胞单克隆形成的数量及大小。将单克隆传代,以观察细胞自我更新能力;随机取6个大克隆传代,细胞增殖至106时,测其生长曲线,检测其增殖能力;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力。以CD133为分子标记,使用免疫磁珠细胞分选技术分选细胞,测定CD133+细胞和CD133-细胞的克隆形成能力。测定Hoechst33342染色是否会影响非SP细胞的增殖能力和单克隆形成能力。结果:A549和H446细胞均能形成3种类型的克隆:大克隆（多于100个细胞）,中克隆（50-100个细胞）和小克隆（少于50个细胞）。克隆细胞传代后,来源于小克隆的细胞不能形成新的克隆,在第2代就凋亡;来源于中克隆的细胞在第2代主要形成小克隆,只形成数量很少的中克隆,在第4代均凋亡;而来源于大克隆的细胞总是形成3种类型的克隆,即使是第10代。45%以上的细胞能够形成大克隆,大克隆传代后又能形成新的克隆;来源于1个大克隆的细胞种植到BALB/C裸鼠身上,10天左右就能形成肉眼可见的肿瘤。磁分选后CD133+细胞和CD133-细胞克隆形成能力及致瘤能力相同;台盼兰染色显示Hoechst33342染色能够明显影响细胞活性,种96孔板后细胞的克隆形成能力和增殖能力明显降低（p＜0.05）。细胞周期显示,A549细胞系中G1、G2和S期细胞分别占43.39%、13.65%和42.96%;H446细胞系中G1、G2和S期细胞分别占62.75%、13.29%和23.96%。A549中能形成大克隆的单个细胞扩增至106需要的时间19～26天,H446中能形成大克隆的单个细胞扩增至106需要的时间17～25天,增长至106后增殖曲线显示,细胞增长速度基本相同。结论:45%以上的A549细胞和H446细胞能够形成大的克隆,该克隆能够自我更新,并且不断增殖,具有致瘤能力。实验结果表明:45%以上的A549细胞和H446细胞是肿瘤始发细胞。