【摘 要】
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紫花苜蓿(Medicago sativaL.)是优质高产的牧草,富含蛋白和粗纤维,被誉为“牧草之王”。苜蓿不仅含有丰富的营养物质还是一种化感作用很强的豆科植物。目前,苜蓿在我国被开发利用的方式越来越广泛,例如:畜牧饲料、茶叶、蔬菜等,对家畜饲料成分改良和作为优质牧草是目前我国主要的利用方式。然而,苜蓿作为化感作用很强的豆科牧草,许多研究对其分泌的化感物质做了分离鉴定,关于基因层面的研究很少。本文以
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紫花苜蓿(Medicago sativaL.)是优质高产的牧草,富含蛋白和粗纤维,被誉为“牧草之王”。苜蓿不仅含有丰富的营养物质还是一种化感作用很强的豆科植物。目前,苜蓿在我国被开发利用的方式越来越广泛,例如:畜牧饲料、茶叶、蔬菜等,对家畜饲料成分改良和作为优质牧草是目前我国主要的利用方式。然而,苜蓿作为化感作用很强的豆科牧草,许多研究对其分泌的化感物质做了分离鉴定,关于基因层面的研究很少。本文以紫花苜蓿化感物质合成途径中的关键酶苯丙氨酸解氨酶的基因为研究对象,对其进行克隆和功能分析,为后续研究奠定基础。主要进展如下:
1.利用同源克隆法得到紫花苜蓿苯丙氨酸解氨酶基因的cDNA序列,通过生物信息学分析可知其阅读框序列为2169bp,编码723个氨基酸、分子量为178kDa。将获得的序列利用DNAman与蒺藜苜蓿PAL基因对比发现,其序列相似性为97.07%,同时也对其编码的蛋白序列进行对比其相似性为93.53%,说明该基因是紫花苜蓿PAL基因,并将其命名为MsPAL。利用实时定量PCR分析了MsPAL基因的组织特异性表达,结果显示,MsPAL基因主要在叶和根中表达。
2.构建了PEG100-PAL超表达载体和pENTR35HK-PALRNAi载体,利用农杆菌介导法侵染紫花苜蓿叶片,培养获得阳性基因苗,并对阳性植株浸提液进行提取,测定对狗尾草种子萌发的影响,结果表明过表达植株内的化感物质含量高于野生型紫花苜蓿。
3.构建了pCAMBIA1300NHsGFP-PAL表达载体,利用农杆菌侵染烟草叶片进行亚细胞定位,利用GFP蛋白的荧光信号确定紫花苜蓿苯丙氨酸解氨酶基因的表达部位。初步判断MsPAL主要在胞质内表达。
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