基于重组人雌激素受体的环境雌激素分析方法研究

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近年来,随着工业的快速发展,大量雌激素类物质被排放到周围环境中。由于其毒性作用大、不易分解,对生物的生存和延续造成了极大的威胁,因此雌激素类物质正受到越来越多的关注,人们对雌激素类物质的研究也日益深入。  目前,我国对于雌激素类物质与雌激素受体的作用机理等研究较少,而且对于环境中的雌激素类物质的分析检测方法以气相色谱和气质联用为主,但是气相色谱预处理复杂,对某些化合物需要衍生化才能进行测定,这在一定程度上限制了其应用。随着雌激素类物质的逐渐增多和对人类危害的加重,分析雌激素受体和雌激素化合物之间的相互作用并建立简便快捷的雌激素类物质检测方法显得十分重要。  本实验选取了典型的雌激素类物质雌二醇,利用前沿亲和色谱法对其亲和常数进行了测定。在实验中,优化了雌二醇的仪器分析条件、进样方式、拟合公式等实验参数,得到了雌二醇与受体蛋白的亲和常数。结果表明,使用定向偶联法固定受体蛋白,在进样流速为0.25ml/min,质谱条件为负离子模式,气体温度为350℃,流速为13L/min,能够得到较好的结果。此方法被证明是可行的,可以用于测定其他雌激素类化合物与重组人受体蛋白的亲和常数。  本实验还采用受体亲和固相萃取法对实际水样进行前处理,利用雌激素受体和雌激素类化合物的特异性反应对水样中的雌二醇和双酚A进行富集分离,经液相色谱质谱联用测定。实验对雌二醇和双酚A的萃取条件、质谱测定条件等进行了优化。该方法简化了样品预处理过程,是一种快速简便、灵敏度高的雌激素类化合物检测方法。希望这些工作能够为今后研究环境雌激素类物质的作用机理和分析检测提供有用的帮助。
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