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目的研究EGCG对人皮肤HaCaT细胞放射敏感性的影响,进一步探讨表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对人正常皮肤角质细胞HaCaT的辐射保护作用及其机制。方法选取人永生化正常皮肤角质细胞HaCaT作为实验细胞。(1)利用四氮唑盐比色试验(MTT)测定EGCG或联合X射线对HaCaT细胞活力的影响,筛选出合适的EGCG的浓度进行后续的实验;(2)给予不同剂量X射线照射,应用克隆形成实验,检测EGCG对HaCaT细胞存活分数及放射敏感性的影响;(3)流式细胞术检测EGCG联合X射线作用后,HaCaT细胞凋亡及周期分布的改变情况;(4)荧光显微镜观察EGCG联合X射线后HaCaT细胞线粒体及ROS的变化;(5)应用Western-blot法分析EGCG联合X射线作用后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及氧化应激相关蛋白HO-1、SOD等的表达水平的变化;(6)免疫荧光实验检测Nrf2表达变化;(7)MTT法检测HO-1siRNA或SnPP联合EGCG后辐射防护作用;(8)荧光素酶活性检测HO-1的诱导表达;(9)免疫组化法观察EGCG对皮肤的诱导表达。结果(1)MTT检测结果显示:EGCG在0-75μmol/L浓度范围内联合X射线可减轻辐射导致的HaCaT细胞活力下降,而没有明显毒性作用;(2)细胞辐射敏感性实验结果显示:EGCG联合辐射组细胞相比单纯照射组,细胞克隆形成率均明显提高(P<0.01)。对于HaCaT细胞,单纯照射组和药物+照射组平均致死剂量(D0)值分别为2.43Gy、2.63Gy,准阈剂量(Dq)值分别为1.78Gy、2.53Gy;(3)Annexin Ⅴ/PI双染法凋亡检测结果显示:对于HaCaT细胞,单纯10、20Gy照射组细胞凋亡率分别是9.25%和12.41%,10Gy组经50μM EGCG处理后,细胞凋亡率分别降低至7.82%和10.24%,20Gy组经50μM EGCG处理后,细胞凋亡率分别降低至6.34%和8.00%,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞仪分析细胞周期显示:在照射剂量点,对于HaCaT细胞,EGCG+照射组与单纯照射组相比,G0/G1期细胞比例上升(p<0.01),G2/M期细胞比例下降,G2期阻滞缓解,差异有统计学意义(p<0.01);(5)Western-blot分析显示:对HaCaT细胞,与单纯照射组相比,EGCG+照射组的Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax蛋白表达水平增加,而细胞氧化应激相关蛋白HO-1的表达量上升,而SOD没有明显改变;(6)免疫荧光实验检测结果显示:EGCG+照射组HaCaT细胞使Nrf2转录调控因子向核内转移;(6)MTT法显示HO-1siRNA或SnPP联合EGCG后辐射防护作用减轻;(7)荧光素酶活性检测EGCG可以诱导HO-1的表达;(8)免疫组化法观察EGCG可诱导大鼠皮肤组织的HO-1的表达。结论EGCG对人皮肤HaCaT细胞具有辐射保护作用,EGCG可能通过清除X射线引起的HaCaT细胞内的自由基,缓解G2期阻滞,改变凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax及氧化应激相关蛋白HO-1的表达等途径从而发挥辐射保护作用。