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目的:本实验通过观察干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)对二甲基苯蒽(DMBA)诱发乳腺癌大鼠的血清中细胞因子和外周血中自然杀伤(NK)细胞活性、T淋巴细胞亚群分布的影响来评价干酪乳杆菌对乳腺癌大鼠免疫功能的调节。通过观察干酪乳杆菌对二甲基苯蒽诱发乳腺癌大鼠的肠道菌群和肠道连接蛋白表达的影响来评价干酪乳杆菌对乳腺癌大鼠肠道屏障功能的调节。为进一步阐述干酪乳杆菌对二甲基苯蒽诱发的大鼠乳腺肿瘤的抑制作用机制提供实验依据。方法:1.干酪乳杆菌对二甲基苯蒽诱发乳腺肿瘤的抑制作用及其免疫功能的影响。(1)动物分组及乳腺癌模型建立:60只雌性SD大鼠适应性喂养一周后,按体质量随机分为正常对照组、模型组、干酪乳杆菌剂量1组和干酪乳杆菌剂量2组。模型组及干酪乳杆菌剂量1组和2组大鼠右侧臀部皮下一次性注射100 mg/kg DMBA建立乳腺癌模型。干酪乳杆菌剂量1组和2组分别灌胃给予4 m L/(kg·d)和8 m L/(kg·d)干酪乳杆菌(1×108 CFU/m L),正常对照组和模型组均给予5 m L/(kg·d)大豆油灌胃。每天1次,持续16周后处死大鼠,腹主动脉取血并留取胸腺,脾脏,小肠组织。(2)计算各组大鼠乳腺癌发生率、潜伏期、平均瘤重、抑瘤率及脏器指数。(3)流式细胞术检测大鼠外周血中NK细胞活性和T淋巴细胞亚群分布。(4)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中细胞因子白介素-4(IL-4)、IL-6、IL-10、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。2.干酪乳杆菌对二甲基苯蒽诱导乳腺癌大鼠肠道菌群和肠道屏障功能的影响。(1)实时荧光定量PCR(q PCR)检测大鼠肠道菌群的变化。(2)HE染色观察大鼠空肠组织病理学改变。(3)ELISA检测大鼠血清中D-乳酸(D-LA)水平。(4)Western Blotting检测大鼠空肠组织紧密连接蛋白occludin和ZO-1的表达水平。结果:1.干酪乳杆菌对二甲基苯蒽诱发乳腺肿瘤的抑制作用及其免疫功能的影响。(1)正常对照组大鼠无肿瘤发生,而模型组、干酪乳杆菌剂量1组和2组均有肿瘤发生。与模型组比较,干酪乳杆菌剂量2组大鼠肿瘤潜伏期延长,肿瘤发生率和平均瘤质量降低(P<0.05);抑瘤率达到41.2%;且该组胸腺指数显著升高(P<0.05);(2)流式细胞术结果显示,与模型组比较,干酪乳杆菌剂量2组大鼠TCRαβ+CD161a+NK细胞百分比、CD3+CD8+T细胞百分比均显著升高(P<0.05);而血中CD3+Foxp3+细胞百分比明显下降(P<0.05)。(3)与正常对照组比较,模型组IL-4水平明显降低,而IL-6、IL-12和TNF-α水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,干酪乳杆菌剂量2组血清IL-4、IL-10浓度显著增高,IL-6、IL-12浓度显著下降(P<0.05);干酪乳杆菌剂量1组和2组TNF-α浓度均显著下降(P<0.05)。2.干酪乳杆菌对二甲基苯蒽诱导乳腺癌大鼠肠道菌群和肠道屏障功能的影响。(1)q PCR结果显示,与正常对照组比较,模型组双歧杆菌、乳酸杆菌和粪肠球菌数量均下降,其中双歧杆菌和粪肠球菌数量下降有统计学意义(P<0.05);干酪乳杆菌剂量1组和2组双歧杆菌数量均比模型组显著升高(P<0.05),而大肠杆菌的数量有所降低。(2)HE染色结果显示,与模型组比较,干酪乳杆菌剂量1组和2组大鼠空肠内绒毛和隐窝的形态明显完整,结构清晰,绒毛的损伤程度较小。但与正常组比较,干酪乳杆菌剂量1组和2组小肠黏膜厚度减少,绒毛的排列也较为凌乱,绒毛尖端有水肿的现象。(3)ELISA结果显示,与正常对照组比较,模型组D-LA浓度显著升高,而与模型组比较,干酪乳杆菌剂量2组D-LA浓度显著下降(P<0.05)。(4)Western Blotting结果显示,与正常对照组比较,模型组紧密连接蛋白occludin和ZO-1的表达均显著下降,而干酪乳杆菌剂量2组均比模型组显著升高(P<0.05)。结论:1.干酪乳杆菌对大鼠乳腺肿瘤的生长具有一定的抑制作用。2.干酪乳杆菌可调节CD4+、CD8+T细胞、NK细胞及调节性T细胞等免疫细胞分布,改善炎性相关细胞因子水平,提高机体免疫调节作用。3.干酪乳杆菌可改善肠道菌群的分布,降低血清中D-LA浓度、增加肠道紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达,提高机体的肠道屏障功能。