肿瘤是目前影响人类健康的重要疾病之一，手术切除、放射治疗、化学药物治疗是临床上治疗肿瘤的几种主要方法。但是以上几种方法在对某些肿瘤，特别是对晚期恶性肿瘤的治疗上，还没有取得令人满意的效果。近年来，通过分析肿瘤患者体内自发性的针对自身肿瘤的免疫反应，已经鉴定出一系列的肿瘤相关抗原。这些肿瘤能够被肿瘤细胞加工、处理并以MHC-Ⅰ-肽复合物的形式被呈递到细胞表面，被特异性的CTL细胞所识别，导致肿瘤细胞的溶解，引发以这些肿瘤抗原为靶标的抗肿瘤免疫。因此，以肿瘤抗原作为靶标，进行肿瘤特异性的免疫治疗，成为当今研究的热点，有望成为除放疗、化疗、手术治疗等常规治疗手段外的治疗肿瘤，特别是恶性肿瘤的“第四种”手段。在这些种类繁多的肿瘤相关抗原中，CT抗原(Cancer／Testis antigens, CT antigens)因其自身特性，是对肿瘤进行免疫治疗的理想的靶标。 CT抗原是一类特殊的肿瘤相关抗原：它们广泛地表达于多种组织来源的恶性肿瘤组织中，而正常组织中(除在睾丸和胎盘组织外)中不能检测到该类抗原的表达；而且该类抗原免疫原性强，能够激发特异性的细胞及体液免疫反应。因此，CT抗原无疑是肿瘤免疫治疗的理想靶标。迄今为止，实验已经证实，来源于多种CT抗原(如MAGE-1，MAGE-3、NY-ESO-1)的抗原肽能够在体外有效地激发特异性的CTL反应。进一步的临床实验表明，用CT抗原来源的CTL表位肽负载到DC细胞上，作为临床上恶性黑色素瘤和其他恶性肿瘤疾病的一种治疗手段，已经取得了一定的治疗效果，提示以CT抗原的CTL表位为基础的肽疫苗是临床上对恶性肿瘤进行免疫治疗的一种行之有效的方法。但另一方面，CT抗原的表达具有异质性，不同患者间、不同组织来源的肿瘤组织间表达具有差异，即使在同一患者同一类型肿瘤发展的不同时期的表达也有明显的差异。因此，鉴定尽可能多CT抗原的CTL表位，对于临床上恶性肿瘤的免疫学治疗具有重要的意义。 慢性白血病肿瘤抗原CML28是由Xiao-Feng Yang等利用SEREX(cDNA表达文库血清分析)方法鉴定的一种新的CT抗原。研究证实，该肿瘤抗原不仅在慢性白血病等第三军医大学硕士学位论文血液系统恶性肿瘤中高表达，而且在多种上皮来源的实体肿瘤中也有高水平的表达，而在翠丸外的正常组织中则未检测到表达。鉴于HLA一A*0201是中国人群中最为常见的HLAI类分子的型别，阳性率高达50%;而且也是北美高加索人种中最常见的HLAI类分子的型别，其阳性率高达98%。因此，如果肿瘤抗原CML28的HLA一A怕201限制的CTL表位被鉴定，将会对于中国人群中和北美高加索人群中CML28表达阳性的肿瘤的免疫治疗，具有十分重要的作用。 在本实验中，我们致力于鉴定CML28的HLA一A*0 201限制性CTL表位。首先，采用超基序和量化基序相结合的预测方法对慢性白血病肿瘤抗原CML28的HLA一A*0 201限制性表位进行预测:先采用超基序法对所有可能成为CML28抗原的HLA一A*0201型CTL表位的九肤筛选，发现符合条件的九肚序列共有45条;然后利用量化基序对每个位点的结合力进行量化，应用九肤结合矩阵对45个表位进行计算和排序，发现符合条件的肤共有巧条，从中选出亲和力最高的四条肤(ALFcGvACA、ALVDAGVPM、ALDSDGTLV、SLLACCLNA)合成纯化鉴定。其次，采用表达HLA一A*0201分子的TZ检测候选肤与HLA一A*0 201分子的结合情况。候选肤ALVDAGVPM和ALDSDGTL刀的亲和力较高，FI值分别是:1 .17，1.17;ALFCGVACA和SLLACCLNA仅有低度亲和力，FI值分别是:0.49，0.%。最后，采用灵敏度高的ELIsPoT和5’c:释放法检测抗原肤体外刺激HLA一A*0 201阳性的健康人PBMC所产生的抗原肤特异性的T细胞分泌的细胞因子和溶解活性。结果显示^LvD^GvPM(173一181)刺激PBMC所产生的T细胞能特异性的杀伤HLA一^*0201和CML28表达阳性的肿瘤细胞LB373一MEL，并分泌较高水平的IFN一丫。为了进一步证实该表位能在体内能够被自然地被加工处理并被呈递，与T细胞相互作用，诱发特异性的CTL产生，用CML28表达质粒PCFCML28质粒免疫HLA一A*0 201转基因鼠，然后取免疫后鼠的脾细胞作为效应细胞，分别以包裹有不同合成肤的lurkat一刀Kb细胞作为靶细胞，作51Cr释放实验，结果显示，效应细胞能够有效杀伤包被有ALVDAGVPM(173一181)肤的Jurkat一^2服b细胞，进一步提示ALVDAGVPM(173一181)为CML28的HLA一A*0201限制性CTL表位。