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研究目的: 本课题研究目的在于分析Notch信号在类风湿关节炎T细胞及滑膜组织中的活化状态，并探讨干预Notch信号通路对胶原诱导的小鼠关节炎发病的影响及其潜在的调节机制，从而明确Notch信号在类风湿关节炎病理机制中的作用，为靶向Notch通路治疗类风湿关节炎提供理论依据。 研究方法: (1)应用牛Ⅱ型胶原免疫DBA/1J小鼠，构建胶原诱导的关节炎模型（CIA模型），对发病小鼠进行关节评分并取病变关节进行HE染色以反映关节炎症的严重程度。 (2)采用Western blot检测CIA小鼠脾脏CD4+T细胞Notch信号胞内段(NICD)的蛋白表达水平。通过免疫组化检测CIA小鼠发病关节滑膜局部NICD的表达。 (3)采用γ-分泌酶抑制剂DAPT腹腔注射CIA小鼠阻断Notch信号通路。利用流式细胞术检测DAPT治疗后CIA小鼠脾脏T细胞亚群的比例，流式芯片检测血浆细胞因子的表达水平，并通过免疫组化方法检测小鼠关节局部炎症情况。 (4)通过在体外培养的CD4+T细胞中加入细胞因子(TGF-β，IL-1β，和IL-6)建立Th17细胞的体外扩增体系，观察加入DAPT以及Notch配体的融合蛋白D1/D3对Th17细胞体外扩增的影响。 (5)采用RT-PCR法检测正常小鼠脾脏与骨髓MDSC Notch信号分子的表达。 研究结果: (1)与对照组小鼠相比，CIA小鼠脾CD4+T细胞NICD蛋白表达水平明显增高，病变关节滑膜组织中NICD蛋白表达亦显著增多。 (2) DAPT体内阻断Notch信号可以延缓关节炎发病并明显改善关节炎症，DAPT处理后CIA小鼠脾脏Th1和Th17细胞比例及绝对数量均显著减少(P＜0.05)，但对Th2细胞及调节性T细胞无明显影响（P＞0.05）。DAPT处理后CIA小鼠血浆IFN-γ和IL-17表达显著降低（P＜0.05）。而血浆IL-4，IL-10和IL-22水平均无明显变化（P＞0.05）。 (3)DAPT处理可抑制Th17细胞的体外扩增，而D3处理可以上调Th17细胞的比例、绝对数和培养上清中的IL-17水平（P＜0.05）。但D1处理并没有对Th17细胞增殖起到明显促进作用。 (4)正常小鼠骨髓与脾脏MDSC表达Notch四种受体分子，四种受体分子在两种MDSC中表达水平未见明显差异（P＞0.05）。骨髓MDSC Dll4表达水平明显高于脾脏MDSC(P＜0.001)，而Jagged1、Jagged2和Dll1三种配体分子在骨髓与脾脏MDSC中表达水平未见明显差异(P＞0.05)，二者均不表达Dll3。与骨髓MDSC相比，脾脏MDSC Notch靶基因Hes1 mRNA表达明显增高(P＜0.01)。 研究结论: CIA小鼠脾脏CD4+T细胞及滑膜局部组织中Notch信号通路呈活化状态。γ-分泌酶抑制剂DAPT处理可以明显改善CIA小鼠关节炎症，其机制可能是通过抑制Notch信号进而抑制Th1/Th17细胞的产生及其相关炎症因子的分泌。本研究证实Notch信号参与了小鼠关节炎的发病过程，并初步探讨了Notch信号相关分子在髓源抑制细胞中的表达，为进一步分析Notch信号在RA病理机制中的作用及发展基于Notch信号通路的免疫治疗提供了理论依据。