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背景：肝癌是我国最常见的恶性肿瘤，据统计，每年约有11万人死于肝癌，其死亡率在恶性消化系统肿瘤中位列第三，约占全球肝癌死亡数的45%左右，其具有高侵袭、转移早、复发率较高、预后差等的临床病理特征，而转移是其死亡率高的主要原因，研究肿瘤转移的发生机制并探索有效的治疗方法对改善患者预后和降低肝癌死亡率有重大意义。近年来，研究显示膜联蛋白A7（Annexin A7，Anxa7）的表达水平与前列腺癌和转移性黑色素瘤的发展和预后有关。即AnnexinA7可能参与肿瘤的发生和淋巴道转移的过程。近年来本课题组利用来源于同一亲本细胞，但淋巴道转移能力不同的小鼠肝癌细胞株——Hca-F和Hca-P，Hca-F细胞淋巴结转移率＞70%，为高淋巴道转移细胞,Hca-P细胞淋巴结转移率＜30%，为低淋巴道转移细胞，并利用抑制性消减杂交技术、基因芯片技术等发现Annexin A7在Hca-F细胞中的表达高于Hca-P细胞，证实降低其表达水平可以抑制小鼠肝癌细胞的分裂增殖，促进凋亡，降低小鼠肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力。提示Annexin A7可能是决定Hca-F细胞淋巴道转移潜能的关键基因之一。目的：1.构建PG-CMV-EGFP-Kan/neo-Annexin A7表达载体，稳定转染至Hca-F细胞，获得Annexin A7基因表达上调的Hca-F细胞株。2.研究Annexin A7基因表达水平上调后小鼠肝癌细胞株Hca-F细胞在细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力等方面的变化，探讨Annexin A7基因的过表达对小鼠肝癌细胞生物学行为的影响。方法：构建PG-CMV-EGFP-Kan/neo-Annexin A7表达载体和PG-CMV-EGFP-Kan/neo-无关序列阴性对照表达载体，转染并筛选培育出PG-CMV-EGFP-Kan/neo-Annexin A7载体稳定转染的Hca-F细胞株和稳定转染无关序列的阴性对照组Hca-F细胞株，进而上调Annexin A7在Hca-F细胞中的表达，经qRT-PCR和Western blot检测Annexin A7在mRNA和蛋白质的表达水平，运用CCK-8试剂盒和Transwell小室比较Annexin A7上调的Hca-F细胞组和正常Hca-F细胞组的增殖、迁移和侵袭能力。结果：1.重组质粒测序结果与Annexin A7基因序列进行比对，基因合成得到的序列与Annexin A7基因序列完全一致，说明Annexin A7基因的重组质粒构建成功。qRT-PCR检测Hca-F细胞、稳定转染PG-CMV-EGFP-Kan/neo-AnnexinA7的Hca-F细胞和稳定转染PG-CMV-EGFP-Kan/neo-无关序列的Hca-F细胞的电泳结果显示，第二组Annexin A7基因的表达有所上调。2..Western blot检测各组稳定转染细胞和Hca-F细胞中Annexin A7蛋白显示，稳定转染PG-CMV-EGFP-Kan/neo-Annexin A7的Hca-F细胞中Annexin A7蛋白质的表达，较Hca-F细胞和转染无关序列的Hca-F细胞上调。3.CCK8检测细胞增殖能力实验结果显示Annexin A7基因表达上调后的细胞增殖能力明显增强。4.Transwell检测细胞迁移和侵袭能力实验结果显示Annexin A7基因表达上调后的细胞的迁移能力和侵袭能力均增强。结论：1.构建PG-CMV-EGFP-Kan/neo-Annexin A7表达载体和PG-CMV-EGFP-Kan/neo-无关序列阴性对照表达载体，并将该载体稳定转染至Hca-F细胞，获得Annexin A7基因表达稳定上调的Hca-F细胞株，经验证AnnexinA7基因上调成功。2.Annexin A7基因表达上调后，Hca-F细胞的细胞增殖能力增强、迁移能力和侵袭能力均增强。