泡球蚴囊液对肝细胞生存能力的影响及初步机制探索

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目的:1.通过测定肝泡型包虫病(HAE)患者肝脏组织中凋亡、自噬相关标记物及DDIT4的表达情况;初步探索凋亡、自噬及DDIT4在泡型包虫病中的作用及三者间的相互作用机制。2.通过体外实验探索泡球蚴源性囊液对肝细胞生存能力的影响,在细胞水平验证泡球蚴囊液是否可诱导凋亡的发生。方法:1.采用免疫组化染色、q-PCR及Western blot检测15例患者病灶边缘带肝组织及同患者正常肝组织中caspase3,Bax,Bcl-2,LC3-I,LC3-II,Beclin-1,m TOR及DDIT4的表达,并分析DDIT4与凋亡、自噬相关标记物的相关性;2.用泡球蚴源性囊液干预体外培养的小鼠肝细胞AML-12,检测细胞增殖能力及细胞活力变化,并结合流式细胞仪凋亡检测试验判断泡球蚴源性囊液对肝细胞的影响。结果:1.组织免疫组化、q-PCR及Western blot实验结果表明:caspase3,Bax,LC3-I,LC3-II,Beclin-1及DDIT4的m RNA及各蛋白在HAE边缘带肝组织及正常肝组织均有不同程度表达,且上述指标在HAE边缘带肝组织的表达高于正常肝组织;而Bcl-2及m TOR m RNA及相应蛋白在HAE边缘带肝组织及正常肝组织均有不同程度表达,且在HAE边缘带肝组织的表达低于正常肝组织;P<0.05,有统计学意义;2.体外实验表明:泡球蚴囊液可抑制小鼠肝细胞增殖及细胞活力;且泡球蚴囊液干预后的小鼠肝细胞凋亡率较对照组升高,最适体积为125ul/2.5ml培养基,P<0.05,有统计学意义。结论:泡球蚴囊液可能通过诱导凋亡、自噬及DDIT4的表达从而影响肝细胞的增殖及病灶周围肝细胞消失,且DDIT4与凋亡、自噬共同促进肝细胞消失,这可能是包虫病发病机制之一。
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