小鼠子宫特络细胞(Telocytes)对腹腔巨噬细胞凋亡与侵袭效应的实验研究

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目的:  Telocytes(TC)广泛存在于人类及哺乳动物的多种组织(包括子宫,输卵管)中,是一种新的间质细胞类型,具有多种潜在的生物学功能。其独特的结构允许它们在正常和病理组织中与各种免疫细胞(包括巨噬细胞)形成连接,可能影响局部免疫细胞的活性,凋亡,侵袭。妇科疾病,诸如子宫内膜异位症、不孕症,均与免疫有密切关系,而TCs潜在的免疫调节作用,在妇科疾病中尚未见报道,目前尚无可靠的细胞学证据。在本研究中,我们体外共同培养原代小鼠子宫TCs和小鼠腹膜腔巨噬细胞(pMACs),检测pMACs的活性,凋亡,侵袭效应的改变情况。旨在提供TCs的免疫调节和免疫监视作用的试验证据。  方法:  选取SPF级BALB/c小鼠用作TCs原代细胞培养和腹腔巨噬细胞的分离提取。  1.过量麻醉处死小鼠,无菌条件下取小鼠子宫组织,用酶消化的方法提取TCs进行原代细胞培养。  2.采用免疫荧光双染色(vimentin,CD34)方法鉴定并观察TCs细胞形态。  3.无菌条件下,向小鼠腹腔内注射巯基乙醇酸盐,刺激腹腔巨噬细胞的产生。三天后用腹腔冲洗的方法提取小鼠腹腔巨噬细胞(pMACs)。  4.TCs传代并生长稳定后,1:10的比例加入腹腔巨噬细胞,建立直接共培养模型,分别在0小时,12小时及24小时观察巨噬细胞形态,固定细胞结晶紫染色。  5.直接共培养模型在0小时及24小时后,固定线粒体荧光染色,在荧光显微镜下观察。  6.用TCs共培养的pMACs作为实验组,空白培养基培养pMACs作为阴性对照组,紫外线辐照及地塞米松影响的pMACs作为阳性对照组,建立共培养模型。  7.在24小时观察巨噬细胞形态,用Annexion-PI法测定巨噬细胞凋亡。用JC-1环境中扮演着重要角色。使利用TCs的免疫辅助功能治疗妇产科疾病有了可能。
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