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本文建立了一种快速有效的泛酸及泛解酸在转化液中的HPLC检测方法。其最优条件为:采用色谱柱Agilent Zorbax SB-Aq柱(5μm,4.6×250mm);流动相为0.02mol/L KH2PO4-乙腈(V∶V=9∶1)pH5.5;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;检测波长200nm,参比波长600nm;进样量:20μL。该条件下,泛酸和泛解酸的保留时间标准偏差分别为0.027%、0.040%,峰面积标准偏差分别为0.29%、0.19%。方法的线性范围试验显示:泛酸的线性方程y=125393.43x+14429.43,相关系数R2=0.9988,线性范围为0.100g/L-2.000g/L;泛解酸的线性方程y=1197.97x-113.86,相关系数R2=0.9992,线性范围0.100g/L-5.000g/L。泛酸回收率为87.22%~111.80%;泛解酸回收率为102.25%~91.32%。钝齿棒杆菌(C.crenatum)中编码L-天冬氨酸α-脱羧酶的基因panD被克隆,并连接到质粒pEKEx2上构建了表达载体pEKEx2-panD,随后电击转化到该菌中,通过抗性平板筛选出重组质粒。提取重组质粒酶切鉴定发现有外源片段的插入。测序结果显示C.crenatum的panD序列与NCBI Gene Bank中的同属菌谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)序列有99%的同源率,软件预测的蛋白质序列则与其完全吻合。panD序列在C.crenatum与C.glutamicum间高度保守。其中优化了C.crenatum的电击转化条件,其最佳条件为2.5kV、200Ω、25μF、5ms,电击后培养时间3h,抗性筛选平板Kan浓度30μg/L。最高转化率达1.81 cfuμg-1DNA。C.crenatum/pEKEx2-panD工程菌的panD基因被诱导过量表达产生有活性的ADC蛋白,可以L-Asp为底物生成β-Ala,菌种分离纯化后β-Ala产量提高至76.47mg/L,稳定性增加。同时研究了工程菌的诱导表达及生物素的影响。该工程菌在基本培养基中的表达需添加诱导物,IPTG效果好于乳糖;完全培养基可使其自诱导,添加诱导物对产量影响较小。最佳诱导温度为28℃。生长因子生物素最佳浓度10mg/L。工程菌以L-Asp及泛解酸为底物合成泛酸,产量36.20μmol/L。抑制泛酸合成途径,可有效增加β-Ala残留量,达到398.57μmol/L。