【摘 要】
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背景:食管癌（Esophagus Cancer,EC）是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一,其主要的病理类型有鳞癌和腺癌。我国食管癌的主要病理类型是食管鳞癌（Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC）,其病理机制复杂且互相影响。炎症贯穿肿瘤整个病理过程的始终,因此,阻抑炎症反应对于提高ESCC的防治水平具有重要意义。ESCC的炎症反应涉及不同的细胞类型、细胞因子、
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背景:食管癌（Esophagus Cancer,EC）是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一,其主要的病理类型有鳞癌和腺癌。我国食管癌的主要病理类型是食管鳞癌（Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC）,其病理机制复杂且互相影响。炎症贯穿肿瘤整个病理过程的始终,因此,阻抑炎症反应对于提高ESCC的防治水平具有重要意义。ESCC的炎症反应涉及不同的细胞类型、细胞因子、信号通路,形成ESCC炎症分子网络。研究ESCC中关键细胞因子和核心的信号通路,将更好的阐明中医药治疗ESCC的作用机制。本文通过观察肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α）诱导下食管鳞癌细胞Eca109对信号通路核因子-κB（Nuclear factor-Kappa B,NF-κB）的影响和分泌炎症因子的情况,建立ESCC的体外炎症模型,研究益气通络解毒方对TNF-α诱导下Eca109细胞体外炎症模型的调控作用,探讨中医药阻抑ESCC炎症反应的分子生物学机制。目的:建立TNF-α诱导的Eca109细胞体外炎症模型,观察其对NF-κB信号通路的影响及分泌炎症因子的情况,探讨益气通络解毒方对TNF-α诱导下Eca109细胞NF-κB信号通路的调控作用,为揭示益气通络解毒方阻抑ESCC炎症反应的分子生物学机制提供实验依据。方法:1.建立TNF-α诱导下Eca109细胞体外炎症模型1.1 MTT比色法检测不同浓度TNF-α诱导Eca109细胞24h对细胞活性的影响。1.2免疫荧光法检测NF-κBp65的入核情况。1.3 ELISA检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-8（IL-8）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）炎症因子的分泌情况。2.观察益气通络解毒方对NF-κB通路介导的炎症微环境的影响2.1 MTT比色法筛选益气通络解毒方对TNF-α诱导下Eca109细胞生长的影响,根据筛选结果,分组干预。2.2免疫荧光法检测益气通络解毒方对TNF-α诱导的NF-κBp65的影响。2.3 ELISA检测益气通络解毒方对下游炎症因子的影响。2.4 Western Blot检测益气通络解毒方对NF-κBp65、p-IκBα、IκBα蛋白表达的影响。结果:1.1 MTT结果显示:TNF-α在诱导Eca109细胞24h后,出现了不同程度的促进作用,20ng/m L OD值升高最明显（P<0.05）。1.2免疫荧光结果显示:20ng/m LTNF-α组细胞出现明显核转移（P<0.01）,NF-κB p65进入细胞核内,NF-κB通路被激活。1.3 ELISA结果显示:IL-8、MMP-9炎症因子分泌水平显著升高（P<0.01）。2.1 MTT结果显示:与TNF-α模型组相比,益气通络解毒方组及NF-κB通路抑制剂PDTC均抑制了TNF-α诱导下Eca109细胞的增殖（P<0.01）。2.2免疫荧光结果显示:与TNF-α模型组相比,益气通络解毒方组及NF-κB通路抑制剂PDTC组均显著降低了NF-κBp65入核的细胞数（P<0.01）,抑制了NF-κB通路的激活。2.3 ELISA结果显示:与TNF-α模型组相比,益气通络解毒方组及NF-κB通路抑制剂PDTC组均降低了Eca109细胞分泌的炎症因子IL-8、MMP-9的表达（P<0.01）。2.4 Western Blot结果显示:与空白对照组相比,TNF-α组NF-κBp65、p-IκBα、p-IκBα/IκBα蛋白表达量升高,IκBα蛋白表达量降低。与TNF-α模型组相比,益气通络解毒方组及NF-κB通路抑制剂PDTC组均降低了NF-κBp65、p-IκBα、IκBα、p-IκBα/IκBα蛋白的表达。结论:1.TNF-α可以促进Eca109细胞增殖,使NF-κBp65进入细胞核内,激活NF-κB通路,能够诱导细胞分泌IL-8、MMP-9炎症因子,升高NF-κBp65、p-IκBα蛋白的表达,降解IκBα蛋白,可诱导Eca109细胞建立体外炎症模型。2.益气通络解毒方可以抑制TNF-α诱导下Eca109细胞增殖,抑制NF-κB通路激活,下调细胞分泌IL-8、MMP-9炎症因子水平,降低NF-κBp65、p-IκBα、IκBα蛋白的表达。抑制TNF-α对NF-κB通路产生的级联激活反应。3.益气通络解毒方对TNF-α诱导下Eca109细胞的调控作用可能与NF-κB通路介导的炎症微环境有关。
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