目的:本研究旨在验证VT预处理H9c2心肌细胞是否有抗缺氧/复氧(Anoxia/Rexoygenation,A/R)损伤作用,并将AMPK特异性抑制剂(Compound C)和VT联合预处理H9c2心肌细胞,进一步探究VT抗A/R损伤机制是否与AMPKα调控线粒体凋亡通路有关。方法:此研究通过选取生长状态良好H9c2心肌细胞,建立急性A/R损伤模型。将经实验处理过的H9c2心肌细胞随机分8组,每组重复3次:(1)正常对照组(Control);(2)A/R组;(3)20μM VT+A/R组;(4)40μM VT+A/R组;(5)80μM VT+A/R组;(6)160μM VT+A/R组;(7)320μM VT+A/R组;(8)160μM VT+Compound C+A/R组。首先通过MTS法检测细胞存活率,微板法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性来确定VT最佳保护浓度;随后采用分光光度法检测线粒体通透性转换孔(m PTP)开放和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)活性;细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(Δψm)情况通过流式技术来检测;AMPKα、AMPKα2和胞浆中细胞色素C(Cyt-c)蛋白表达通过蛋白免疫印迹(Western blotting)技术来检测;最后采用流式技术和TUNEL法来检测来确定细胞凋亡水平。结果:1.与A/R组比较,细胞存活率和LDH结果显示160μM VT预处理H9c2心肌细胞保护效果最佳(p﹤0.01)。2.与A/R组比较,VT预处理组H9c2心肌细胞,AMPKα、AMPKα2蛋白的表达上调(p﹤0.01),H9c2心肌细胞内ROS水平得到显著降低,线粒体膜电位震荡受到抑制(p﹤0.01)。3.与A/R组比较,VT预处理组H9c2心肌细胞,显著抑制m PTP的开放、Caspase-3的激活和减少线粒体内Cyt-c的释放(p﹤0.01),因此明显减少细胞凋亡水平(p﹤0.01)。4.与VT+A/R组预处理的比较,VT+Compound C预处理的H9c2心肌细胞,由于Compound C抑制AMPKα、AMPKα2激活,从而显著抑制VT保护心肌细胞的效果(p﹤0.01)。结论:VT预处理可以降低心肌细胞A/R损伤程度,其分子机制与上调AMPKα调控线粒体凋亡通路有关。