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在稻米储藏蛋白质中,赖氨酸(Lys)是第一限制性氨基酸,含量很低,使得稻米蛋白质的其它氨基酸不能被人体充分利用。提高稻米蛋白质的赖氨酸含量,可提高稻米蛋白质的利用率。人乳铁蛋白(hLF)可促进人体肠道对铁的吸收、调节体内铁的平衡,具有广谱抗菌、消炎、抑制肿瘤细胞生长、调节机体免疫反应等多种生理功能,这些功能若能为水稻所利用,将大大增加稻米的生物有效性。利用基因工程手段将高赖氨酸蛋白基因和人乳铁蛋白基因导入水稻中,可有效改善稻米的营养保健品质。为了消除转基因植物中选择标记基因带来的安全隐忠,本研究分别将目的基因(Lys基因、hLF基因)和标记基因(Hyg)构建在不同的T-DNA区,通过农杆菌介导遗传转化水稻,带选择标记基因的T-DNA和带目的基因的T-DNA可能整合到水稻基因组的不同染色体上,转基因植株后代发生自交分离后,可获得无选择标记的转基因水稻。本研究主要结果如下:1.构建了含有hLF基因的双T-NDA植物表达载体pCDHyg-hLF,该载体一个T-DNA区含潮霉素抗性基因hyg;另一个T-DNA区含hLF基因,hLF基因的启动子选用玉米Ubiquitin启动子。2.构建了含有Lys基因的双T-NDA植物表达载体pCDHyg-Lys,该载体一个T-DNA区含潮霉素抗性基因hyg;另一个T-DNA区含Lys基因,Lys基因的启动子选用水稻胚乳特异表达启动子GluB-1。3.构建了同时含有hLF基因与Lys基因的双T-NDA植物载体pCDHyg-Lys-hLF,该载体一个T-DNA区含潮霉素抗性基因hyg;另一个T-DNA区含Lys基因和hLF基因,这两个基因的启动子选用水稻胚乳特异表达启动子GluB-1。4.分别将以上三个双T-DNA植物表达载体转化优质粳稻台粳九号,其中pCDHyg-hLF转化台粳九号,经潮霉素筛选获得抗性愈伤30个,抗性愈伤分化成苗,共获得植株20株;pCDHyg-Lys转化台粳九号,获得抗性愈伤18个;pCDHyg-Lys-hLF转化台粳九号,获得抗性愈伤26个。