鸡传染性喉气管是一种遍布世界各地的急性接触性呼吸道传染病，由传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起，以呼吸困难、咳嗽、常咳出带血渗出物为发病特征。ILTV属于疱疹病毒科α疱疹病毒亚科，目前多用鸡传染性喉气管炎的弱毒疫苗进行预防，其中大部分弱毒疫苗株具有温和的致病性，因此可能有毒力返强的危险。 近年，ILTV基因组的大部分序列及其功能已经确定，这为基因工程疫苗的研制奠定了基础。研究表明ILTV属于疱疹病毒D型基因组，gB基因编码205KD糖蛋白复合物，能诱导体液免疫和细胞免疫，是该病毒的主要保护性抗原基因，也是研究基因工程疫苗的首选目的基因，表达gB糖蛋白是预防传染性喉气管炎的新方法。 本论文以疫苗株ILTV基因组为模板扩增出gB基因片段连接到载体DGEM-T Vector，对目的片段gB基因进行了序列测定和同源性分析，与英国Thome V882毒株、美国ILTV632毒株、澳大利亚SA 2毒株gB基因的核苷酸同源性分别为100％、100％和99.4％，氨基酸同源性分别为99.8％，99.9％和98.7％，说明它是十分保守的。然后将gB基因定向克隆于原核表达载体pBV221中构建了重组质粒pBV-gB，将其转化到受体菌DH5α中，菌株DH5α（pBV-gB）经温控诱导后，SDS-PAGE电泳可见表达的特异蛋白条带。ELISA检测说明gB基因在大肠杆菌中的表达产物具有很好的反应原性，但是鸡胚中和试验结果表明该重组菌株仅能部分中和1个EID₅₀剂量的北京株ILTV强毒。 原核表达的目的蛋白缺少生物活性和免疫原性，活载体疫苗可以克服这一缺点，因此本论文又构建了大肠杆菌一分枝杆菌穿梭表达质粒pRR-α-gB，并将其电转化至耻垢分枝杆菌，ELISA检测表明重组菌株M．smegmatis mc² 155（pRR-α-gB）的表达产物具有很好的反应原性。Western blot检测说明ILTV的gB基因在分枝杆菌中获得了表达并具有良好的免疫原性。鸡胚中和试验结果表明该重组菌株可以中和1个EID₅₀剂量的ILTV强毒，能够保护SPF鸡胚抵抗强毒攻击。它在安全性方面比弱毒疫苗更加优越，不形成潜伏感染，不会散毒。此外，该重组菌株免疫的鸡可以通过血清学方法与自然感染ILTV的鸡加以区别。因此本实验研究的工程菌M．smegmatis mc² 155（pRR-α-gB）将有希望取代现用的ILTV弱毒疫苗，彻底改变ILT防制现状。