人前列腺癌中已糖激酶-2基因对辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1,TH2)的影响

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目的:探讨在人前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响。方法:通过sh RNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的稳转株(sh-HK2),同时使用无义序列构建慢病毒感染PC3细胞系获得阴性对照细胞(NC),q PCR与Western blot验证敲低结果。培养前列腺癌细胞(NC和sh-HK2)48 h后分离癌细胞获得上清液,提取健康人外周血单个核细胞(PBMCs),TH1实验组(sh-HK2组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过稳转株的上清液共培养48h,TH1阴性对照组(NC组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过阴性对照细胞的上清液共培养48h。TH2实验组(sh-HK2组),TH2阴性对照组(NC组)诱导条件变更为TH2诱导条件,其他不变。48h后分光光度仪检测各共培养体系中乳酸水平。然后提取各组中PBMCs使用植物血凝素-M(PHA-M)另外培养24 h,Elisa法检测TH1诱导条件下各组中PBMCs的IFN-γ和TH2诱导条件下各组PBMCs的IL-4的分泌。结果:qPCR与WB显示HK2基因敲低结果显著,在TH1诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IFN-γ升高,在TH2诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IL-4降低。实验组与对照组相比乳酸含量均下降。结论:HK2基因在前列腺癌PC3中的高表达使肿瘤周围环境乳酸浓度升高,并使周围共培养体系中IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,由此导致肿瘤周围细胞免疫功能下降,而使针对肿瘤无效的体液免疫增强,可能促进肿瘤进展。
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