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第一部分 MBF-1基因在急性白血病中的表达及意义研究研究背景急性白血病(AL)是一种常见的血液系统恶性肿瘤,由于造血干细胞恶性克隆,导致细胞增殖、凋亡及发育障碍。在成人血液肿瘤中有较高的发病率。早期B细胞因子(EBF-1)是核转录因子,为B细胞发育所需,在幼稚B细胞中大量表达,随着B细胞的发育成熟,EBF-1基因的表达量也随之减少,当分化至浆细胞时,EBF-1的表达则消失。同时EBF-1基因的缺乏也会导致B细胞的发育阻滞,使之停留在祖B细胞阶段。可见EBF-1基因与急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)息息相关。但是目前关于EBF-1基因在B-ALL中的表达和作用知之甚少,在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)以及急性髓系白血病(AML)中是否表达的研究更是处于空白阶段。综上所述,本研究将把AL患者分为初发、缓解、复发三个阶段,探讨EBF-1基因随着AL病程的发展是如何表达的,AL患者初发时EBF-1基因的表达量与预后是否相关,在病人达到缓解后,EBF-1基因的表达与白血病微小残留(MRD)的关系,以及在急性T淋巴细胞白血病、急性髓系白血病中是否也有表达。目的1、检测病人髓系肿瘤细胞中EBF-1基因的表达,并使用各系细胞株验证,探讨EBF-1基因在髓系细胞是否表达。2、分别检测初发、缓解、复发阶段的ALL和AML病人EBF-1基因的表达水平,探讨EBF-1基因在AL中的表达特点及临床意义。3、检测CR(完全缓解)患者分别在MRD(-)、MRD(+)情况下EBF-1基因的表达,探讨EBF-1基因与MRD的一致性。方法65例急性白血病患者以及30例健康志愿者纳入研究。流式细胞学以及实时荧光定量PCR的方法分别检测EBF-1基因在急性白血病患者以及各系细胞株之间蛋白水平和mRNA水平的表达。采用SPSS(22.0版)软件包进行数据处理。结果1、B系细胞株:U2932、Riva;髓系细胞株:HL-60、Kg-1α以及T系细胞株:Jurkat、Loucy中均检测到EBF-1基因的表达。2、在ALL和AML患者中,均可见EBF-1基因的表达,且EBF-1基因在B-ALL中的表达稍高于在T-ALL以及AML患者中的表达。3、在CD33、CD117阳性的髓系肿瘤细胞以及CD34阳性的干祖细胞中,均检测到EBF-1基因的表达。4、在急性白血病患者初发组、缓解组、复发组以及正常对照组这四组之间,EBF-1基因在蛋白水平和mRNA水平的表达量有差异,初发AL患者EBF-1基因表达量明显高于正常对照组(P<0.001);缓解后的AL病人EBF-1基因的表达量明显低于初发时的表达量(P<0.001);复发的AL患者EBF-1表达水平再次升高,且表达量高于正常对照组(P<0.001)以及缓解组(P<0.001),但是与初发组比较无统计学意义。5、51例CR病人,分为12例MRD(+)组,以及39例MRD(-)组。MRD(+)组患者EBF-1基因的表达量明显高于MRD(-)组患者(P<0.001)。结论本篇研究通过检测EBF-1基因在各系细胞株以及急性白血病患者中的表达量,发现:1、EBF-1基因不仅在B系中表达,在髓系细胞中也发现表达。2、EBF-1基因在AML和ALL患者中均有表达,且在AL患者中,EBF-1基因在B-ALL患者中的表达高于在T-ALL中及AML中的表达。3、EBF-1基因在初发急性白血病患者体内表达上调,显著高于健康对照者以及患者达到骨髓缓解时EBF-1基因的表达量。4、EBF-1基因表达量与患者相对应的MRD水平之间呈一致性,即微小残留检测为阳性的患者,其对应的EBF-1基因的表达量高于微小残留阴性患者对应的EBF-1基因的表达量。第二部分泊那替尼挽救治疗allo-HSCT后复发伴T315I突变CML研究背景与目的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,以t(9;22)(q31;qll)染色体(Ph染色体)异位及出现BCR/ABL融合基因为遗传学特征。靶向药物—酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)是当今初诊CML的一线治疗,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)仅作为对TKIs不能耐受、耐药或进展期CML治疗的选项。BCR/ABL基因突变是导致CML对TKIs耐药和治疗失败的最主要原因,T315I突变是BCR/ABL基因突变中十分常见的一种突变,对一、二代TKIs均表现耐药,对于T315I突变患者、尤其是移植前进展期患者,即使进行allo-HSCT其疗效也不理想。一些临床研究表明,泊那替尼作为第三代TKIs对T315I突变的患者有好的疗效。本文回顾性分析泊那替尼挽救性治疗T315I突变慢性髓系白血病(CML-T315I)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的疗效。对象与方法12例allo-HSCT后复发的CML-T315I患者(10例为移植前存在T315I突变,2例为移植后复发出现T315I突变)纳入该回顾性分析,泊那替尼应用包括泊那替尼单药或联合化学药物治疗和或供体淋巴细胞输注(DLI)。通过直接测序分析获得的用于RTQ-PCR样品的BCR/ABL KD突变。用Sanger测序法对BCR/ABL KD(氨基酸219-506)突变进行测序。复发标准包括血液学复发、细胞遗传学复发和分子生物学复发。研究结果12例移植后复发患者中,2例分子学复发患者给予单药泊那替尼治疗,10例血液学复发患者中1例患者给予单药泊那替尼治疗,3例患者给予泊那替尼联合供者淋巴细胞输注(DLI),剩余6例患者使用泊那替尼联合化学药物治疗序贯DLI。泊那替尼治疗后,11例患者获得有效,其中血液学反应为的10例患者获得血液学完全缓解(CHR),1例血液学部分缓解(PHR)和1例无效(NR);细胞遗传学反应为10例完全细胞遗传学反应(CCyR)、1例部分细胞遗传学反应(PCyR)和1例无细胞遗传学反应;分子生物学反应的为9例患者获得完全分子学反应(CMR),1例主要分子生物学反应MMR和2例无分子生物学反应。获得CHR的时间中位数为36 d(29～96)d,获得CCyR的时间中位数为63 d(32～127)d,获得CMR的时间中位数为89 d(27～152)d。泊那替尼治疗后中位随访时间598 d(93～1 470)d,9例患者存活,3例死亡,死亡原因包括2例复发,1例治疗无效。12例复发患者使用泊那替尼治疗后2年总存活率和无复发存活率分别为(75.0土12.5)%和(31.7±14.9)%,治疗后生存时间中位数为621 d(93～1 470)d。结论小样本回顾性研究提示,泊那替尼挽救性治疗allo-HSCT后复发CML-T315I患者有较好的疗效。