论文部分内容阅读
目的：研究丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2(MAPKAPK-2)、热休克蛋白27(HSP27)在肾缺血后处理减轻肾脏缺血再灌注损伤中的作用，探索肾缺血再灌注损伤防治的新途径。 方法：雄性SD大鼠96只，随机分为4组:①假手术组（Sham组）;②缺血再灌注组（I/R组）;③缺血后处理组（IPO组）;④缺血后处理+p38 MAPK抑制剂SB203580组（SB组）。每组又按再灌注时间不同分为再灌1h、3h、6h和24h四个时间点，各个时间点6只大鼠。采用结扎右侧肾蒂，夹闭左侧肾蒂60 min后松开动脉夹制备肾脏缺血再灌注损伤模型。缺血后处理模型手术操作基本同缺血再灌注模型组。缺血60 min后，进行6次开放阻断循环(开放10 sec+阻断10 sec)，然后充分开放灌注。SB组p38 MAPK选择性抑制剂SB203580于缺血前尾静脉注入。 采用化学方法测定各时间点血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)浓度;免疫印迹方法测定肾组织中MAPKAPK-2、p-MAPKAPK-2以及HSP27、p-HSP27的变化。再灌注24 h时，免疫组织化学方法检测肾组织p-MAPKAPK-2、p-HSP27蛋白的表达及分布情况;光镜下观察肾组织病理学改变;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡指数(AI)的变化。 结果： 1.血清BUN及SCr的变化Sham组各时间点的血清BUN及SCr水平变化不大(P＞0.05)。I/R组及SB组血清BUN及SCr从再灌注1h开始升高，再灌注24 h达高峰。与Sham组比，I/R组各时间点血清BUN及SCr含量均明显升高，具有显著性差异(P＜0.05);与I/R组相比，IPO组各时间点的血清BUN及SCr含量均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05); SB组各时间点的血清BUN及SCr含量显著升高，与IPO组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2.肾组织形态学改变I/R组可见明显的肾小管上皮细胞水肿、空泡变性、管腔扩张、基底膜皱缩以及细胞、蛋白管型;IPO组上述病理改变明显轻于I/R组;SB组肾小管上皮细胞多呈空泡变性和局灶性坏死，肾小管管腔扩张，肾小管内见大量管型和坏死脱落细胞，部分肾小管结构毁损。 3.TUNEL染色结果与Sham组比较，I/R组肾小管上皮细胞凋亡显著增多，细胞凋亡指数显著升高(P＜0.05);IPO组肾小管上皮细胞凋亡明显减少，凋亡指数明显降低，与I/R组相比，具有显著性差异(P＜0.05);与IPO组相比，SB组凋亡指数明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.MAPKAPK-2表达的变化 免疫组织化学结果显示:I/R组p-MAPKAPK-2蛋白表达明显升高，与Sham组相比，差异有统计学意义(P＜0.05);与I/R组相比，IPO组p-MAPKAPK-2蛋白表达显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05);与IPO组相比，SB组p-MAPKAPK-2蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。 免疫印迹结果显示:I/R组p-MAPKAPK-2表达从1h开始逐渐升高，6h达高峰，此后表达逐渐降低，但再灌24 h p-MAPKAPK-2表达仍显著高于Sham组(P＜0.05)。与I/R组相比，IPO组各时间点p-MAPKAPK-2表达均显著升高，以6h升高最明显，两组各对应时间点相比差异均有统计学意义(P＜0.05); SB组各时间点表达均显著低于IPO组(P＜0.05)。各组各时间点MAPKAPK-2基础表达无明显变化(P＞0.05)。 5.HSP27表达的变化 免疫组织化学结果显示:与Sham组相比，I/R组p-HSP27蛋白表达显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05);与I/R组比较，IPO组p-HSP27蛋白表达进一步升高，具有显著性差异(P＜0.05);SB组p-HSP27蛋白表达显著降低，与IPO组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。 免疫印迹结果显示:Sham组各时间点仅有少量p-HSP27表达，I/R组及IPO组均在再灌1h时表达开始逐渐升高，再灌6h时达高峰，随后逐渐下降。与Sham组比较，I/R组各对应时间点p-HSP27蛋白表达均显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。与I/R组相比，IPO组各对应时间点p-HSP27蛋白表达均明显升高，具有显著性差异(P＜0.05)。与IPO组相比，SB组各时间点p-HSP27蛋白表达明显降低，两组各对应时间点相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。各组各时间点HSP27基础表达无明显变化(P＞0.05)。 结论：肾缺血后处理对肾缺血再灌注损伤有明显保护作用，其机制可能是通过激活p38 MAPK/MAPKAPK-2通路，活化其下游的内源性效应分子HSP27，继而抑制肾小管上皮细胞凋亡实现的。