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目的 验证异甜菊醇是否可以通过影响mi R-146a表达调控巨噬细胞极化,以达到减轻肠缺血再灌注损伤的效果,并合用异甜菊醇与Treg细胞,观察两者是否可以进一步增强巨噬细胞抗炎作用,更有效地减轻肠缺血再灌注损伤。方法 建立小鼠小肠缺血再灌注损伤模型,并应用不同剂量的异甜菊醇对其进行干预,将小鼠分为5组,每组6只,分别为假手术组,缺血再灌注损伤(I/R)组,低剂量给药组,中剂量给药组和高剂量给药组,观察异甜菊醇是否可以减轻肠道缺血再灌注损伤及其对肠道巨噬细胞极化表型的影响,并确定异甜菊醇最适剂量。再提取Treg细胞并进行体外扩增,使用mi R-146a agomir和antagomir调节Treg细胞mi R-146a水平并回输至小鼠,再次创建小肠缺血再灌注损伤模型,应用最适剂量异甜菊醇,将小鼠分为5组,每组6只,分别为假手术组,I/R组,异甜菊醇单纯给药组,mi RNA-146a上调Treg联合异甜菊醇给药组,mi RNA-146a下调Treg联合异甜菊醇给药组,检测各组小鼠体内巨噬细胞表型、促炎因子TNF-α、IL-1β及抗炎因子TGF-β1、IL-10分泌量,以及Notch1通路蛋白表达水平,明确肠缺血再灌注损伤情况,并研究异甜菊醇作用机制。结果论文第一部分I/R组凋亡细胞率较假手术组明显增加,M1型巨噬细胞比例明显增加,促炎因子TNF-α和IL-1β的量显著增高(均为P<0.01),抗炎因子TGF-β1、IL-10分泌则显著降低(P<0.05),Notch1及NF-κB p65两种蛋白量增加。相对于I/R组,三组给药组细胞凋亡减轻,M1型巨噬细胞浸润减少,M2型巨噬细胞增多,促炎因子TNF-α和IL-1β的分泌量降低(P<0.05),抗炎因子TGF-β1及IL-10的分泌增高(P<0.05),Notch1和NF-κB p65的量及其m RNA表达明显降低,mi R-146a水平明显增高(P<0.05)。其中,中高剂量给药组的抗炎效果相同且强于低剂量给药组。论文第二部分上调Treg mi R-146a水平并联合异甜菊醇组,M1型巨噬细胞的浸润明显低于单独给药组,促炎因子TNF-α和IL-1β的分泌量显著降低(P<0.05),抗炎因子TGF-β1及IL-10的分泌显著增高(P<0.05)。同样,Notch1和NF-κB p65表达量进一步降低。而下调Treg mi R-146a水平并联合异甜菊醇组较I/R组,M1型巨噬细胞的浸润仍明显增加,促炎因子TNF-α和IL-1β的分泌量显著增加(P<0.05),抗炎因子TGF-β1及IL-10的分泌显著降低(P<0.05)。结论 实验第一部分主要探究了异甜菊醇对巨噬细胞极化的影响,并得出减轻小鼠小肠组织缺血再灌注损伤的最佳异甜菊醇剂量。通过对比给药组与I/R组巨噬细胞极化的不同,可以发现异甜菊醇可能通过调节mi R-146a促进巨噬细胞向M2型转化,增加抑炎因子分泌,减少促炎因子产生,来达到减轻肠缺血再灌注损伤的作用。进一步对其机制进行研究,可以发现异甜菊醇可以通过增加mi R-146a的表达抑制Notch1信号通路,减少NF-κB p65的活化使巨噬细胞减少向M1型巨噬细胞转化,而更多地向M2型巨噬细胞转化。第二部分发现与异甜菊醇合用时Treg细胞中mi R-146a的缺乏可以使炎症损伤进一步加重,而mi R-146a的增多可以进一步促进巨噬细胞向M2型转化,从而发挥更好地抗炎效果。证明了异甜菊醇可能通过对Treg细胞内的mi R-146a水平调控影响巨噬细胞极化,从而保护小肠组织。