论文部分内容阅读
背景与目的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一类起源于一小群异常细胞,即白血病干细胞(leukemia stem cells, LSCs)的造血系统恶性疾病。LSCs具有自我更新和分化的能力,是AML发生及复发的根源。然而,目前对LSCs的特性仍所知甚少。蛋白质组学是以生命功能的执行者蛋白质为切入点,直接研究蛋白质的组成与调控。作为一种简单、快速、高通量的技术,蛋白质组学为肿瘤发病机制的研究、诊治起着重要的作用。为此,本研究选择AML-M2型白血病CD34+细胞作为研究对象,寻找AML-M2型白血病特异性/相关性蛋白分子,以探索AML-M2型白血病发病的分子机制,分子诊断和治疗的靶点。方法首先,应用免疫磁珠分选(magnetic active cell sorting, MACS)方法,从AML-M2初治患者骨髓及造血干细胞移植供者动员后的外周血中分选出CD34+细胞,并用流式细胞术检测其纯度。然后,通过荧光差异双向凝胶电泳(fluorescence two-dimensional difference in-gel electrophoresis,2-D DIGE)分离CD34+细胞的蛋白质,并通过Typhoon扫描仪获取凝胶图谱,DeCyder图像分析软件识别差异表达蛋白质点。最后,通过质谱以及生物信息学对差异表达蛋白点进行分析。结果经MACS分选后,用流式细胞术检测所得细胞的纯度结果显示,病人CD34+细胞纯度平均为98%,正常人CD34+纯度平均为92%。荧光差异双向凝胶电泳结果表明,在正常对照与AML-M2型白血病CD34+细胞之间存在1.1倍以上差异表达的蛋白质点有25个。对这25个差异蛋白质点进一步通过质谱进行分析,得到了15个蛋白质肽指纹图信息。生物信息学分析显示,这些蛋白点可能代表的蛋白质包括热休克蛋白90β、2型热休克蛋白90α、热休克蛋白70类似物、热休克蛋白70-1、热休克蛋白70-2、转铁蛋白、血清转铁蛋白前体、人增殖细胞核抗原、钙调结合蛋白、钙网蛋白前体、丙酮酸激酶、M2型丙酮酸激酶、醛还原酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADP+)、 PRO2619蛋白以及未知蛋白质分子,这些蛋白质涉及细胞能量代谢、细胞凋亡、细胞耐药、信号转导和细胞增殖。结论应用MACS方法、蛋白质组学及生物信息学,本研究成功筛选出AML-M2型白血病CD34+细胞差异表达的蛋白质,这些蛋白分子可能与CD34+细胞的自我复制、分化、增殖、耐药、凋亡有关,它们有可能是AML-M2型白血病CD34+细胞特异性/相关性分子,在AML-M2型白血病的发生机制中可能起着重要作用,可能为AML-M2型白血病提供分子诊断和治疗的靶点。