鹅副黏病毒病是由鹅源副黏病毒(Goose Paramyxovirus，GPMV)引起的鹅的一种急性、烈性传染病，具有较高的发病率和死亡率，给养鹅业带来了严重的危害。目前，临床上对GPMV感染尚无特效的治疗药物，接种疫苗是预防和控制该病发生的主要手段。由于传统的灭活疫苗和弱毒疫苗存在着免疫原性较弱和毒力返祖等问题，因此，开发研制新型疫苗势在必行。随着分子生物学等相关技术的发展，利用基因工程技术，制备基因工程疫苗，预防和控制该病成为研究热点。 GPMV为有囊膜单链负股不分节段RNA病毒，由6种结构蛋白组成：NP(核衣壳蛋白)、P(磷蛋白)、M(基质蛋白)、F(融合蛋白)、HN(血凝素-神经氨酸酶)、L(高分子量的RNA聚合酶)，其中，HN蛋白是该病毒的主要保护性抗原之一。HN蛋白具有HA和NA两种活性，前者(血凝素)负责识别靶细胞含唾液酸的受体，并介导病毒对靶细胞的吸附，神经氨酸则具有分解、破坏受体的能力，并促使新生的病毒粒子从感染的细胞膜上释放，这两种活性对于病毒侵染细胞都具有重要的作用。因此，构建含有主要保护性抗原HN基因的真核表达载体，对预防该病具有重要意义。 本研究旨在完成鹅源副黏病毒吉林分离株部分生物学特性研究的基础上，将本实验室成功构建的HN基因真核表达质粒pVAXⅠ-HN和空载体pVAXⅠ，通过碱裂解法进行大量提取，免疫BALB/c小鼠，观察免疫效果。 将30只BALB/c小鼠随机分成3组，每组10只，分别设为pVAXⅠ-HN质粒试验组，pVAXⅠ空质粒对照组和生理盐水阴性对照组。免疫四次后杀鼠，无菌分离小鼠脾细胞，利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性；用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量；分离小鼠血清，利用双方阵法建立间接ELISA反应条件，检测小鼠血清中GPMV抗体。 MTT结果表明，试验组与两组对照组的淋巴细胞增殖试验刺激指数(SI)差异不显著，其SI值统计结果分别为1.18±0.03、1.12±0.04和1.16±0.03。流式细胞术检测结果显示，试验组与两组对照组的CD3+、CD4+及CD8+T细胞数量差异均不显著，其中，CD3+数量统计结果分别为40.66％±1.43％、41.07％±4.72％和40.94％±5.32％，CD4+数量统计结果分别26.00％±1.83％、25.32％±2.89％和25.77％±4.01％，CD8+数量统计结果分别为12.55％±1.19％、12.79％±2.08％和12.42％±1.87％。采用双方阵法，经反复摸索，最终确定建立GPMV特异性抗体的间接ELISA反应条件：抗原最佳包被浓度为30μg/mL，抗体最佳稀释度为1：400，羊抗鼠酶标二抗最佳稀释度为1：5000。采用上述反应条件，测定各组小鼠OD492值，结果显示，试验组小鼠血清中GPMV特异性抗体水平显著高于空载体对照组和生理盐水对照组，ELISA试验OD492的统计值分别为1.36±0.10、0.36±0.02和0.31±0.02。 由此说明，GPMV HN基因真核表达质粒可以诱导小鼠产生明显的体液免疫，虽然并没有产生理想的细胞免疫水平，但可以确定本实验室构建的pVAXⅠ-HN真核表达质粒能在机体内表达，为鹅副黏病毒病核酸疫苗的研究奠定了基础。