As2O3联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用及对Fas受体表达的影响

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目的:通过不同浓度的三氧化二砷、顺铂及两药联合应用对人肺腺癌A549细胞的增殖、细胞周期、诱导凋亡及Fas受体表达情况的影响,初步探讨三氧化二砷、顺铂及两药联合对肺癌细胞的体外效应及可能存在的机制,从而为临床上寻找新的化疗药及化疗增敏剂提供理论和实验依据,以期进一步提高肺癌的化疗效果并减轻化疗带来的副作用。方法:通过体外培养人肺腺癌A549细胞,取处于对数生长期的细胞进行实验。依据实验分组处理细胞,通过MTT法检测不同分组药物对细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察药物对细胞的形态学影响;流式细胞术检测细胞的凋亡率及细胞周期阻滞情况;免疫组织化学法检测药物对人肺腺癌A549细胞Fas受体表达的影响。结果:1.三氧化二砷、顺铂单独用药对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。三氧化二砷与顺铂单独作用于人肺腺癌A549细胞,均可以抑制细胞的增殖,随着作用时间的延长和药物浓度的增加,其对细胞的增殖抑制作用逐渐增强,即具有时间依赖和浓度依赖的特性。2.不同浓度的三氧化二砷和顺铂对人肺腺癌A549细胞形态学的影响。从形态学方面观察,三氧化二砷与顺铂,在相同较小剂量(1、2μmol/L)作用于人肺腺癌A549细胞时,细胞的死亡主要以诱导凋亡为主,表现为细胞形态变圆,贴壁较差,较大剂量时(8μmol/L),细胞多数表现为坏死的形态学改变,在显微镜下可以看到细胞内出现空泡并有大量坏死的细胞碎片出现。3.三氧化二砷联合用药对人肺腺癌A549细胞增殖的影响2μmol/L的顺铂分别与1、2、4、8μmol/L的三氧化二砷联合用药,联合用药对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用强于单独用药组(p<0.01),联合用药时,随着三氧化二砷浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,但1μmol/L三氧化二砷联合顺铂与2μmol/L三氧化二砷联合顺铂组在24小时其抑制率差异无统计学意义(p>0.05),随着作用时间的延长,其抑制作用亦增强。4.三氧化二砷、顺铂及联合用药对细胞凋亡及细胞周期的影响。与对照组比较,2μmol/L的三氧化二砷与2μmol/L顺铂作用于人肺腺癌A549细胞48小时均具有诱导细胞凋亡的作用与对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)。2μmol/L顺铂组的凋亡率又大于三氧化二砷组的凋亡率(p<0.05)。联合用药组诱导细胞凋亡的能力大于单独用药组(p<0.01,p<0.01);2μmol/L三氧化二砷作用人肺腺癌A549细胞48小时后,表现为G2/M期阻滞;顺铂组表现为S期阻滞;2μmol/L的三氧化二砷与2μmol/L顺铂联合用药,G0/G1、G2/M期均表现出周期阻滞现象。5.三氧化二砷、顺铂及联合用药对细胞内Fas受体表达的影响。本实验证明三氧化二砷和顺铂单独用药均具有上调Fas受体表达的作用,与对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)。三氧化二砷组与顺铂组之间比较差异无统计学意义(p>0.05)。联合用药组Fas受体的表达大于单独用药组(p<0.01,p<0.01)。结论:实验组各浓度的三氧化二砷与顺铂均单独用药具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖及诱导凋亡的作用,并呈现时效与量效的关系。三氧化二砷将细胞周期阻滞于G2/M期,顺铂将细胞周期阻滞于S期。其诱导细胞凋亡的机制可能是通过上调细胞内的Fas受体而实现的。
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