噬菌体对断奶仔猪生长性能、肠道黏膜屏障功能及盲肠微生物区系的影响

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:majinrao
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噬菌体作为抗生素的潜在替代品,在对抗细菌耐药性方面发挥着重要作用。本研究的目的是评价噬菌体对断奶仔猪生长性能、肠道黏膜生理和屏障功能的影响。将120头初始体重为(7.35±0.03)kg的25日龄的健康断奶仔猪,随机分为4组,每组5个重复,每个重复6头仔猪。4组仔猪分别饲喂对照饲粮(添加50 mg/kg奎烯酮,有效含量25 mg/kg;75 mg/kg金霉素,有效含量11.25 mg/kg)及添加200、400和600 mg/kg噬菌体饲粮。试验期21 d。试验一:于饲养试验开始和结束时对仔猪称重,称重前禁食12 h。试验期间详细记载各组仔猪的饲料消耗量。试验结束后计算仔猪生长性能等相关指标。于饲养试验结束的当天上午8:00,在各组重复中挑选一头仔猪,进行前腔静脉采血,采血前禁食12 h。血样离心后收集备用。结果表明:1)与对照组相比,400 mg/kg和600 mg/kg噬菌体组仔猪末重显著增加(P<0.05);400 mg/kg噬菌体组显著降低了料重比与腹泻频率(P<0.05)。此外,随着饲粮噬菌体添加量的提高,仔猪腹泻频率、腹泻指数呈二次曲线变化(P=0.024和P=0.015)。2)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组中仔猪血清IL-10含量显著升高(P<0.05),IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.05)。试验二:于饲养试验结束的当天上午8:00,在各组重复中挑选一头仔猪,进行前腔静脉采血,采血前禁食12 h。血样离心后收集备用。仔猪屠宰后,从腹腔取出空肠和回肠,刮取肠黏膜分装在编号的无菌冻存管中,后保存至-80℃冰箱。同时分离出十二指肠、空肠和回肠中段,用于制作石蜡切片。结果表明:1)与对照组相比,400mg/kg噬菌体组能显著提高仔猪十二指肠、空肠和回肠中V/C(P<0.05)。2)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组能显著降低血清D-Lactate和DAO的含量(P<0.05)。3)与对照组相比400 mg/kg和600 mg/kg噬菌体组能显著提高空肠黏膜Claudin-1、Occludin和ZO-1 m RNA的表达(P<0.05);且400 mg/kg噬菌体组能显著提高空肠黏膜Occludin蛋白的表达(P<0.05)。4)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组能显著提高空肠黏膜TLR-2、TLR-4和TLR-9m RNA的表达(P<0.05)。5)400 mg/kg和600mg/kg噬菌体组中回肠黏膜s Ig A、TGF-α和ITF含量显著高于对照组(P<0.05)。试验三:试验结束后,从每个重复中选取一头健康且接近平均体重的仔猪屠宰,宰后用p H计测定十二指肠、空肠、回肠和盲肠内容物p H值。同时分离部分十二指肠和空肠,刮取肠黏膜,编号后分装在无菌冻存管,后置于-80℃冰箱。随后取盲肠中段肠管和结肠,两端结扎后放于液氮中,再转入-80℃冰箱。结果表明:1)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组能够显著降低仔猪回肠p H(P<0.05)。2)与对照组相比,400和600 mg/kg噬菌体组显著提高了仔猪盲肠中乙酸、丁酸和总酸,结肠中乙酸和总酸含量(P<0.05)。4)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组仔猪十二指肠黏膜蔗糖酶和乳糖酶活性显著增加(P<0.05),空肠黏膜麦芽糖酶活性显著升高(P<0.05)。试验四:试验结束后,从每个重复中选取一头健康且接近平均体重的仔猪屠宰,剖开腹腔,迅速分离盲肠,剪取带有食糜的肠段。通过对不同处理组的断奶仔猪肠道微生物基因组DNA提取,后经PCR特异性扩增,得到仔猪肠道微生物细菌的16SrRNA序列。利用Mi Seq高通量测序技术对扩增后的序列进行测序。研究噬菌体对断奶仔猪盲肠微生物区系结构组成的影响。结果表明:1)400 mg/kg和600 mg/kg噬菌体组中仔猪盲物内容物菌群丰富度、物种组成均匀度较高。2)随着噬菌体添加量的提高,盲肠内容物菌群相似度越来越低,600 mg/kg噬菌体组最低。3)在门水平上,厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门为优势菌群。与对照组相比,各噬菌体组中放线菌门含量均显著降低(P<0.05),拟杆菌门显著提高(P<0.05)。属水平上,Ruminococcaceae为优势菌属。与对照组相比,600 mg/kg噬菌体组显著提高了Ruminococcaceae的水平(P<0.05)。4)噬菌体对断奶仔猪盲肠菌群结构与代谢产物相关性分析显示Lactobacillus菌的相对丰度与丙酸和丁酸呈正相关(P<0.05,R>0.6)。综上所述,饲粮中添加噬菌体可提高断奶仔猪生长性能降低腹泻指数。并且在改善仔猪小肠形态结构和功能上具有一定的作用,同时可调节肠道消化酶活性,改善肠道内微生物的结构,促进仔猪肠道健康。其中尤以噬菌体剂量为400 mg/kg效果最佳。
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