论文部分内容阅读
目的探索不同浓度阿司匹林对结直肠癌braf突变细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响及可能的作用机制.筛选出阿司匹林最佳治疗剂量,为阿司匹林的抗癌作用提供理论基础.
方法利用MTT实验检查不同浓度阿司匹林(0mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L和10mmol/L)对结直肠癌RKO及RKO-braf突变细胞24h,48h,72h,96h和120h增殖的影响;利用平板克隆实验检测不同浓度阿司匹林对结直肠癌RKO和RKO-braf细胞克隆形成能力的影响;利用划痕实验检测不同浓度阿司匹林对结直肠癌RKO和RKO-braf细胞24小时、48小时划痕愈合能力的影响;Transwell实验检测不同浓度阿司匹林对RKO和RKO-braf细胞迁移和侵袭能力的影响;Westernblot检测不同阿司匹林浓度作用于RKO细胞和RKO-braf突变细胞48h后迁移相关蛋白的变化.
结果MTT实验结果显示不同浓度阿司匹林浓度(2.5mmol/L,5mmol/L和10mmol/L)对RKO细胞和RKO-braf突变细胞活力均有抑制作用,随着时间和药物浓度的增加,而且有显著性差异(P<0.05).平板克隆实验显示不同浓度阿司匹林浓度对RKO细胞和RKO-braf突变细胞细胞克隆形成均有抑制作用,不同浓度阿司匹林(0mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L和10mmol/L)作用下,RKO细胞克隆形成率分别为:96.67±1.76%,70.90±1.01%,3.17±1.76%,3.00±1.00%;RKO-braf突变细胞克隆形成率分别为:97.17±1.26%,71.33±2.01%,4.17±0.77%和3.33±0.58%,不同阿司匹林浓度之间有显著性差异(P<0.05).划痕实验显示:阿司匹林浓度(2.5mmol/L,5mmol/L,10mmol/L)对RKO细胞和RKO-braf突变细胞划痕愈合能力均有抑制作用,而且有显著性差异(P<0.05).随着时间的推移抑制率明显增加.Transwell实验显示不同阿司匹林浓度作用下,RKO细胞24小时后迁移细胞数目分别为:294.33±5.51,291.00±5.29,46.67±4.04,32.67±4.51;RKO-braf突变细胞各浓度对应迁移细胞数目分别为:285.00±7.00,270.00±5.57,50.33±5.03和44.00±5.57.不同浓度的药物对结直肠癌细胞迁移能力有抑制作用,而且有显著性差异(P<0.05).Westernblot实验结果显示阿司匹林浓度(5mmol/L和10mmol/L)能显著下调cox-2和VEGF水平,这提示阿司匹林可以通过下调COX-PGE2-PI3K通路及VEGF表达水平来抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.各实验组中,阿司匹林浓度5和10mmol/L之间没有显著性差异.
结论不同浓度阿司匹林对结直肠癌RKO和RKO-braf突变细胞增值、迁移和侵袭均有抑制作用,作用强度和阿司匹林浓度相关,5mmol/L的阿司匹林效价比最高,我们推荐体内实验及临床应用要参照浓度为5mmol/L阿司匹林.其作用机理可能通过抑制COX-PGE2-PI3K信号通路有关.
方法利用MTT实验检查不同浓度阿司匹林(0mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L和10mmol/L)对结直肠癌RKO及RKO-braf突变细胞24h,48h,72h,96h和120h增殖的影响;利用平板克隆实验检测不同浓度阿司匹林对结直肠癌RKO和RKO-braf细胞克隆形成能力的影响;利用划痕实验检测不同浓度阿司匹林对结直肠癌RKO和RKO-braf细胞24小时、48小时划痕愈合能力的影响;Transwell实验检测不同浓度阿司匹林对RKO和RKO-braf细胞迁移和侵袭能力的影响;Westernblot检测不同阿司匹林浓度作用于RKO细胞和RKO-braf突变细胞48h后迁移相关蛋白的变化.
结果MTT实验结果显示不同浓度阿司匹林浓度(2.5mmol/L,5mmol/L和10mmol/L)对RKO细胞和RKO-braf突变细胞活力均有抑制作用,随着时间和药物浓度的增加,而且有显著性差异(P<0.05).平板克隆实验显示不同浓度阿司匹林浓度对RKO细胞和RKO-braf突变细胞细胞克隆形成均有抑制作用,不同浓度阿司匹林(0mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L和10mmol/L)作用下,RKO细胞克隆形成率分别为:96.67±1.76%,70.90±1.01%,3.17±1.76%,3.00±1.00%;RKO-braf突变细胞克隆形成率分别为:97.17±1.26%,71.33±2.01%,4.17±0.77%和3.33±0.58%,不同阿司匹林浓度之间有显著性差异(P<0.05).划痕实验显示:阿司匹林浓度(2.5mmol/L,5mmol/L,10mmol/L)对RKO细胞和RKO-braf突变细胞划痕愈合能力均有抑制作用,而且有显著性差异(P<0.05).随着时间的推移抑制率明显增加.Transwell实验显示不同阿司匹林浓度作用下,RKO细胞24小时后迁移细胞数目分别为:294.33±5.51,291.00±5.29,46.67±4.04,32.67±4.51;RKO-braf突变细胞各浓度对应迁移细胞数目分别为:285.00±7.00,270.00±5.57,50.33±5.03和44.00±5.57.不同浓度的药物对结直肠癌细胞迁移能力有抑制作用,而且有显著性差异(P<0.05).Westernblot实验结果显示阿司匹林浓度(5mmol/L和10mmol/L)能显著下调cox-2和VEGF水平,这提示阿司匹林可以通过下调COX-PGE2-PI3K通路及VEGF表达水平来抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.各实验组中,阿司匹林浓度5和10mmol/L之间没有显著性差异.
结论不同浓度阿司匹林对结直肠癌RKO和RKO-braf突变细胞增值、迁移和侵袭均有抑制作用,作用强度和阿司匹林浓度相关,5mmol/L的阿司匹林效价比最高,我们推荐体内实验及临床应用要参照浓度为5mmol/L阿司匹林.其作用机理可能通过抑制COX-PGE2-PI3K信号通路有关.