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低温胁迫严重影响着植物的生长发育。为了抵御低温的危害,植物在长期进化过程中形成了一套适应和抗寒机制,随着分子生物学和基因工程技术的发展,许多冷诱导基因在不同的植物被分离出来,植物抗寒机制的研究也更加深入。CBF是一类与低温胁迫相关的转录因子,它能够与COR基因启动子中的CRT/DRE元件特异地结合,激活COR基因的表达,提高植物的抗寒性。因此,CBF类转录因子能够综合地改良植物的抗寒性状,是目前比较理想的植物抗逆工程基因。茶树是一种喜温暖气候的木本常绿植物,冻害不但严重影响茶叶的产量和质量,同时也制约着茶树的地理分布。我们一直致力于茶树抗寒研究,通过差减杂交分析,我们在茶树叶片中鉴定了10个受低温诱导的cDNA克隆片段(Cs-CORs),本研究根据这些EST)序列设计序列特异引物,通过RACE技术分离了茶树CBF类似基因的全长cDNA序列,GenBank登录号为EU563238.1,该序列包含一个长780bp的ORF,编码一个由259个氨基酸残基组成的多肽链。氨基酸序列分析表明Cs-CBF含有一个保守的AP2结合域,同时含有两段CBF特有的多肽序列PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAW。利用Real-time PCR技术对Cs-CBF基因进行差异表达研究,结果表明,室温条件下,茶树叶片中的CBF基因几乎不表达,低温处理后,CBF基因表达快速升高,2h后开始下降,但在36h内仍保持较高的水平,说明Cs-CBF基因受低温诱导。洋葱亚细胞定位实验证明了Cs-CBF基因编码的蛋白质位于细胞核中,将Cs-CBF及各种缺失突变与GAL4 DNA结合结构域融合进行酵母杂交实验,证明了Cs-CBF的C末端酸性结构域在转录激活活性中起着重要作用,且核心区域存在于C末端端部的68个氨基酸中。最后,我们成功构建了转基因烟草表达载体pBI121-CsCBF,为烟草转化实验做准备,进而研究Cs-CBF基因在植物体内的调控模式以及该基因在植物抗寒方面的作用。