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急性肝损伤的诱发因素有很多种,包括药物、化学、微生物等,严重时可导致急性肝衰竭甚至危及生命,对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)是药物引发急性肝损伤中最常见的一种,大剂量或长期使用均会使肝脏受损,而过高的炎症与氧化应激水平则被认为是其导致肝脏损伤的重要因素。迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)是一种天然多酚类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗微生物、抗抑郁等多种药理活性,多个研究表明其在不同类型肝损伤模型中发挥了保护作用。因此,本研究以RA为主要研究对象,以高剂量APAP建立小鼠急性肝损伤模型,探究RA对急性肝损伤的保护作用及机制。方法:(1)APAP诱导急性肝损伤模型的建立:选取300 mg/kg和400 mg/kg两个剂量,以腹腔注射的方式给予APAP,分别在3 h、6 h、8 h取样,以血清肝损伤标志物ALT、AST水平和肝脏组织病理损伤程度为判断依据确定合适的APAP剂量以及作用时间,建立小鼠急性肝损伤模型。(2)RA对APAP致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制:在成功建立小鼠急性肝损伤模型的基础上,选取10、20、40 mg/kg三个剂量RA对小鼠进行预处理,用ELISA的方法检测小鼠血清细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平,ELISA法或生化试剂盒检测小鼠肝脏抗氧化能力GSH-Px、GSH、CAT、SOD、T-AOC以及脂质过氧化产物MDA和炎症相关酶MPO的水平,q RT-PCR检测肝组织中细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、i NOS以及酶MPO、GSH-Px、CAT、SOD和APAP代谢酶CYP2E1 m RNA转录水平,同时检测了凋亡相关因子Bax、Bcl-2和抗氧化基因GCLC、GCLM的m RNA转录水平,并用免疫组化技术检测肝组织中抗氧化保护基因Nrf2、HO-1的表达及Western blot检测GCLC、GCLM的蛋白表达水平。结果显示:(1)APAP浓度在400 mg/kg且作用时间6 h时可显著升高小鼠血清中ALT、AST的水平,病理组织学观察发现肝脏损伤程度随APAP作用时间增加而加重;(2)抗炎能力:RA能显著降低小鼠肝损伤中炎性相关炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α和酶MPO的水平以及IL-1β、IL-6、IL-10、MPO、i NOS的m RNA转录水平;(3)抗氧化应激能力:RA提高了小鼠肝损伤中抗氧化剂GSH-Px、GSH、CAT、SOD和总抗氧化能力T-AOC的水平以及GSH-Px、CAT和SOD的m RNA表达,降低了脂质过氧化指标MDA的水平;(4)保护机制:RA可显著升高小鼠肝损伤中Nrf2、HO-1、GCLC及GCLM的蛋白表达水平,并且可在转录水平上升高GCLC、GCLM的m RNA表达;RA可上调抗凋亡蛋白Bcl-2以及下调促凋亡蛋白Bax的转录水平;RA可降低肝损伤中APAP主要代谢酶CYP2E1的转录水平。综上所述,RA在机体中发挥了抗炎、抗氧化及抗凋亡的作用。结论:(1)本研究以剂量为400 mg/kg的APAP,作用6 h,成功建立APAP致小鼠急性肝损伤模型;(2)RA对APAP诱导的小鼠急性肝损伤有良好的抗炎、抗氧化作用;(3)RA可通过调节抗氧化基因Nrf2及其下游HO-1、GCLC、GCLM的基因表达情况发挥抗氧化作用,并能通过调节CYP2E1以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的转录水平对肝损伤产生一定的保护作用。