化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠的干预作用及其对肾脏结蛋白表达的影响

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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)泛指由于糖尿病导致的肾小球病变,是糖尿病发展到一定阶段出现的严重并发症。本实验通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DN大鼠模型,予化瘀通络中药进行干预,通过观察大鼠一般情况、肾脏组织形态学变化,以及检测24小时尿蛋白定量、血常规、血生化指标、结蛋白(desmin)表达水平等,研究化瘀通络中药的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠80只,适应性饲养一周,随机选15只做为正常对照组(C),剩余大鼠禁食12小时以上,一次性腹腔注射STZ55mg/kg,72小时后尾静脉测随机血糖≥16.7mmol/L为造模成功。成模大鼠随机分为模型组(M)、全方组(Q)、化瘀组(H)、通络组(T)、厄贝沙坦组(E),相应药物灌胃16周。于第16周末收集大鼠24小时尿液。禁食12小时以上,动物麻醉状态下取血检测血液指标,并留取肾组织进行光镜、电镜、免疫组化、Real-Time PCR检测。结果:1实验大鼠的一般情况正常对照组大鼠一般情况良好;其它大鼠在注射STZ成模后,均出现典型的三多一少症状,且以模型组最为显著;各给药组大鼠在治疗过程中症状均有不同程度的缓解。治疗期间全方组死亡1只,厄贝沙坦组死亡2只,模型组死亡6只。224小时尿蛋白定量(24h UTP)结果显示:各治疗组24小时尿蛋白定量水平与正常对照组及模型组均有差异(P<0.05),比正常对照组明显升高,比模型组明显降低;各治疗组之间比较,化瘀组24小时尿蛋白定量明显高于与全方组、通络组和厄贝沙坦组(P<0.05);全方组、通络组和厄贝沙坦组之间无明显差异(P>0.05)。3血液指标检测结果结果显示:血常规中模型组与正常对照组、全方组、化瘀组、通络组、厄贝沙坦组相比,血小板计数明显增多(P<0.05),正常对照组、全方组、化瘀组、通络组、厄贝沙坦组之间无明显差异(P>0.05);模型组、厄贝沙坦组与正常对照组、全方组、化瘀组、通络组相比,大型血小板比率(P-LCR)显著升高(P<0.05);模型组、厄贝沙坦组之间,正常对照组、全方组、化瘀组、通络组之间均无明显差异(P>0.05)。血生化中模型组及治疗各组大鼠与正常对照组相比甘油三酯水平明显升高(P<0.05),全方组、通络组、厄贝沙坦组较模型组、化瘀组甘油三酯水平明显降低(P<0.05);模型组、全方组、化瘀组、通络组与正常对照组相比血浆总蛋白水平明显降低(P<0.05),模型组、全方组、化瘀组、通络组之间血浆总蛋白水平无明显差异(P>0.05),厄贝沙坦组与正常对照组血浆总蛋白水平无明显差异(P>0.05);模型组及治疗各组大鼠与正常对照组相比血浆白蛋白水平明显降低(P<0.05),各治疗组血浆白蛋白水平比模型组明显升高(P<0.05),各治疗组之间无明显差异(P>0.05)。4糖尿病性白内障(Diabetic Cataract,DC)结果显示:正常对照组未发现白内障大鼠;模型组全部为白内障大鼠;全方组白内障发病率45%;化瘀组白内障发病率42%;通络组白内障发病率92%;厄贝沙坦组白内障发病率90%。全方及化瘀组糖尿病性白内障大鼠明显少于通络及厄贝沙坦组。5肾组织形态学观察5.1光镜观察正常对照组大鼠肾组织结构清晰正常;模型组大鼠肾小球肥大,肾小囊呈裂隙状,甚至出现球囊粘连,基底膜明显增厚,系膜基质增生;与模型组相比,各治疗组病理改变明显减轻;各治疗组间比较,化瘀组病理表现略重于其它治疗组。5.2电镜观察正常对照组大鼠肾组织结构清晰正常;模型组大鼠肾小球毛细血管基底膜均质性增厚,系膜基质增多,足细胞足突广泛融合;与模型组相比,各治疗组病理改变明显减轻;各治疗组间比较,化瘀组病理表现略重于其它治疗组。6免疫组织化学法检测肾组织desmin的表达结果显示:正常对照组desmin在肾小球系膜细胞可见少量表达,足细胞无明显表达;与正常对照组相比,造模各组大鼠肾组织中desmin表达明显增加(P<0.05),且在足细胞和系膜细胞均有表达;与模型组相比,各治疗组desmin的表达明显减弱(P<0.05);治疗各组间比较,化瘀组desmin的表达最强,与全方组、通络组和厄贝沙坦组有显著差异(P<0.05)。7Real-Time PCR检测肾组织desmin mRNA的表达结果显示:与正常对照组相比,造模各组大鼠肾组织中desmin mRNA表达量明显增加(P<0.05);与模型组相比,各治疗组desmin mRNA的表达量明显减弱(P<0.05);治疗各组间比较,化瘀组desmin mRNA的表达量最大,与全方组、通络组和厄贝沙坦组有显著差异(P<0.05)。结论:1化瘀通络中药能改善糖尿病肾病大鼠的一般情况,减少尿蛋白,维持血浆蛋白含量,减轻糖尿病肾病病理表现,这些方面的作用与厄贝沙坦相似。2化瘀通络中药能减少血小板数量,降低其活性,从而防止DN血栓、栓塞等并发症,该方面作用优于厄贝沙坦。3化瘀通络中药能降低血浆甘油三酯水平,改善糖尿病脂质代谢紊乱,通络中药在该方面作用优于化瘀中药。4化瘀通络中药能减少糖尿病性白内障的发生,化瘀中药在该方面作用优于通络中药及厄贝沙坦。5化瘀通络中药能降低糖尿病肾病大鼠肾脏desmin表达水平,提示其对DN的治疗作用可能与其保护足细胞有关。6综合分析,化瘀通络中药优于化瘀中药及通络中药单独应用。
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