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目的本研究通过体外细胞实验探讨ERK抑制剂PD98059是否提高结肠癌细胞HT-29对RTX(雷替曲塞)的敏感性,并对其中的相关作用特点及机制进行深入研究,为结肠癌的临床治疗提供可靠的实验数据支持。方法1、培养人结肠癌细胞HT-29,待培养至对数生长期时进行传代种板,细胞贴壁后按不同处理因素进行分组:对照组、单纯RTX组、单纯PD98059组及联合用药组。2、各处理组细胞在作用24h后于普通光学倒置显微镜下观察各组的细胞生长状态及形态学改变。3、使用MTT法及细胞计数法分别检测各实验组的细胞被处理24h后的细胞增殖活力。4、采用流式细胞仪法检测被处理24h后的各实验组细胞的凋亡率是否出现差异。5、各试验组细胞被处理8h后,将每组的细胞总蛋白提取,使用western blot法检测各组细胞中Ras、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的相对表达量。6、在无菌无酶状态下提取出各试验组细胞的总RNA,反转录得到K-Ras、ERK1、ERK2基因的c DNA后,通过实时荧光定量PCR法检测各组相关基因的相对表达量。结果1、倒置显微镜下观察可见与对照组相比,单纯PD98059组形态及数量变化不明显,而单纯RTX组与联合用药组细胞数量均明显减少,并可见核碎裂、凋亡小体等典型细胞凋亡形态学变化,且联合用药组的细胞数量及形态学变化程度比其他各组更明显。2、MTT法及细胞计数法结果发现相比于对照组,单纯PD98059组细胞增殖率未出现明显变化,而单纯RTX组与联合用药组的细胞增殖活力均降低,且联合用药组的细胞增殖率的降低程度最深。3、流式细胞仪检测细胞凋亡率变化方面,可见与对照组相比各实验组的细胞凋亡率均明显升高,且联合用药组的细胞凋亡趋势最显著。4、western blot法检测细胞相关蛋白的表达量时可见与对照组相比,单纯PD98059组细胞的Ras、ERK1/2蛋白表达无明显变化,p-ERK1/2蛋白表达下调;单纯RTX组细胞的ERK1/2、Ras、p-ERK1/2蛋白表达无明显差异;联合用药组细胞的Ras、ERK1/2蛋白表达均无明显变化,p-ERK1/2蛋白表达均下调。5、RT-PCR结果表示各实验组相比于对照组在ERK1、ERK2、K-Ras mRNA的表达上均未表现出明显的差异(即P>0.05)。结论1、RTX对结肠癌细胞HT-29具有抑制增殖及促进凋亡作用。2、ERK抑制剂在某种程度上可以增加RTX对HT-29的增殖抑制及凋亡促进作用,即ERK抑制剂可增加肠癌细胞对RTX的敏感性。3、ERK抑制剂可能通过RAS-MEK-ERK通路在蛋白水平而非基因水平上增加结肠癌细胞对RTX的敏感性。