肝细胞核因子4a (HNF4a)是核受体超家族成员之一,在肝细胞的分化和功能维持中起着重要的作用。细胞穿膜肽(Cell Penetrating Peptides, CPPs)是一类由少于30个氨基酸组成的多肽,可以有效地将目标分子包括蛋白、RNA、DNA等导入细胞。本课题利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4a (HNF4a)蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白P-HNF4a对肝癌细胞的作用。我们构建了能够表达P-HNF4a的表达质粒pET28a-P-HNF4a,并优化了P-HNF4a的表达与纯化条件,经浓缩、透析后获得浓度为2.1μM、纯度为81%的融合蛋白P-HNF4a;成功将P-HNF4a转导进入肝癌细胞,利用Western blot检测其穿膜效率,发现穿膜效率高达69.5%,显示PEP-1可高效地携带HNF4a进入细胞；核浆分离和细胞免疫荧光检测表明P-HNF4a进入细胞后定位在细胞核,荧光素酶报告基因实验发现P-HNF4a可促进下游基因的表达,提示P-HNF4a具有转录因子的功能；P-HNF4a可促进Huh7细胞肝功能基因的表达,并抑制干细胞相关基因的表达；利用CCK-8法检测肝癌细胞的增殖,细胞划痕实验、小室迁移实验以及小室侵袭实验检测肝癌细胞转移能力,结果显示P-HNF4a显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。以上结果提示P-HNF4a可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,抑制肝癌细胞的恶性生物学行为,表明利用P-HNF4a转导肝癌细胞是诱导分化治疗肝癌的潜在手段。