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第一部分MiR-21和PTEN/PI3K／AKT信号通路相关蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义目的：探讨miR-21、PTEN/PI3K／AKT信号转导通路相关蛋白在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。方法：应用实时荧光定量RT-PCR（real-time fluorescence quantitiveRT-PCR,real time FQ-PCR）检测结直肠癌组织中的miR-21表达水平，应用免疫组化（immunohistochemistry，IHC）SP法检测结直肠癌组织中PTEN、PI3K、AKT的表达水平。并探索他们之间的关系，以及与临床病理参数之间的相关性。结果：与癌旁正常组织比较，miR-21的表达水平明显增高（p<0.05）,PTEN的表达水平明显降低（p<0.05）, PI3K、AKT的表达水平均明显增高（p<0.05）, miR-21、PTEN、PI3K、Akt表达与患者年龄、性别、肿瘤部位无关（P>0.05），与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移有关（P<0.05）。miR-21与PTEN的表达之间呈负相关（r=-0.396, p<0.05）；PTEN与PI3K蛋白阳性表达之间呈负相关（r=-0.354,P<0.05）；PTEN与Akt蛋白阳性表达之间呈负相关（r=-0.365, P<0.05）；PI3K与Akt蛋白阳性表达之间呈正相关（r=0.645, P<0.05）。结论：miR-21可通过抑制PTEN激活P13K／Akt信号通路，进而促进CRC的发生发展。第二部分miR-21在结直肠癌中负向调控PTEN的研究目的：探讨抑制microRNA-21（miR-21）表达对PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路中各蛋白的影响及miR-21可能调控的靶基因。方法：通过反义寡核苷酸（anti-sense oligonucleotide, ASO）技术抑制结直肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证。通过蛋白质免疫印迹法(Western blot，WB)检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变。利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因，荧光素酶双报告基因实验检测PTEN活性。结果：miR-21在HCT116中表达最高，在SW480中表达最低。miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制，PTEN mRNA无明显变化。而PTEN蛋白的表达明显上调（P <0.05）, PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调（P <0.05）。筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一。结论： PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控CRC过程。miR-21在结直肠癌中表达增高，通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移。第三部分抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响目的：探讨抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法：应用MTT(四甲基偶氮唑盐比色)法、克隆形成实验、流式细胞技术（FCM）、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、克隆形成能力、周期、凋亡、侵袭、迁移；并用Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达，双荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果：与阴性对照组（NC）、空白对照组（MOCK）比较，转染抑制组（IN）miR-21表达水平明显降低（p<0.05）。下调miR-21对结肠癌细胞株的增殖抑制作用明显（p<0.05）；克隆形成能力下降（p<0.05）；下调miR-21能增加结肠癌细胞株的凋亡（p<0.05）；细胞G0／G1期的细胞明显增多(p<0.05),S期比例明显降低（p<0.05）；Transwell实验证实miR-21下调后，结肠癌细胞侵袭（p<0.05）和迁移（p<0.05）能力明显下降；Western印迹实验显示，抑制miR-21表达后HCT116细胞株中PTEN蛋白表达明显增加（p<0.05），PTEN荧光素酶相对活性明显增加（p<0.05）。结论：miR-21可通过抑制PTEN进而调控结直肠癌细胞生物学行为。PTEN可能是miR-21的靶基因之一。