随着人民生活水平的提高,过量饮酒引起的肝脏损伤日益增多,已经成为影响公众健康的问题。尽管对酒精性脂肪肝(简称酒精肝)的损伤机理,包括脂肪肝诱因和形成过程等,已有较为全面的认识,然而,目前尚无有效控制和治疗酒精肝的方法。其原因在于,缺少合适的酒精肝模型,因此难以筛选和找到有效的防治手段。目前酒精肝模型以动物为主,建立模型一般需要八周时间,高成本和低效率限制了其应用。而体外酒精肝模型则可以在短时间(1-2天)内建立,具有成本低、适合快速筛选治疗药物的优势。但是,传统的体外酒精肝模型采用单层贴壁肝细胞培养方式,并以高浓度的乙醇进行短时间刺激,该方法大大偏离了体内乙醇慢性肝损伤的情况,不能模拟体内酒精肝的发生过程。本文针对传统体外模型的缺点,采用能长期维持肝功能的凝胶包埋培养肝细胞,通过条件优化和体内外比较验证该模型的可靠性,并用于筛选抗酒精肝的中药有效成分,为寻找有效的酒精肝治疗药物奠定基础。论文分为三部分。第一部分为酒精肝模型的建立,考察了不同细胞培养方式、培养基和乙醇浓度对模型的影响,并采用针形电极在线检测了有无ParafilmM封口膜密封的培养皿中乙醇挥发速率差异。结果发现,肝细胞在Parafilm M封口膜密封的培养皿内以Williams’ medium E培养基和凝胶包埋培养的方式并经过48h的200 mM乙醇作用,可以反映乙醇导致的体内肝细胞损伤。第二部分对该模型进行了详细评价,分析了包括脂质积累、过氧化压力和CYP 2E1诱导等各项指标。研究表明,经过乙醇处理后,体外模型的损伤指标呈现与体内酒精肝一致的变化趋势,说明该模型可以表征体内酒精肝的情况。然后,使用针形电极对肝灌流中的乙醇浓度变化(表征体内肝脏中乙醇浓度)进行了检测,初步尝试关联体内外模型的乙醇浓度,进一步验证了体外模型的可靠性。第三部分采用已建立的模型进行保肝药物筛选,找到了一种有效抗酒精肝的中药有效成分——纳米水飞蓟宾。总之,本文建立的体外酒精肝模型,可用于抗酒精肝药物筛选,尤其在利用我国丰富中药资源发掘有效保肝药物方面,具有广阔的应用前景。