研究背景 当今社会，恶性肿瘤已成为严重威胁小儿生命的主要疾病之一。其中约1／3为白血病，2／3为实体瘤。小儿恶性肿瘤病死率在5-14岁组中占第二位，是威胁儿童生命的仅次于意外伤亡的最主要的疾病。因此，认真研究提高对小儿恶性肿瘤的诊治水平，是我们儿科医学工作人员目前应致力而为的研究课题。 端粒是真核生物染色体3’末端的一个特殊结构，端粒酶是维持这一特殊结构的长度和功能稳定的重要物质。两者与细胞的生长、分化以及肿瘤的发生、发展有着密切的关系。人们研究发现，在人正常体细胞中均无端粒酶活性，但在男性生殖细胞、被激活的淋巴细胞和再生组织的干细胞中有端粒酶活性，而大多数恶性肿瘤组织和永生细胞株均显示明显的端粒酶活性。端粒酶活性还在人的囊胚和发育至16-18周的胚胎组织(除脑组织外)中测到，但出生2个月后测不到端粒酶活性。由此可知，端粒酶可能是胎儿器官发生过程中所必须的，出生后如果端粒酶活性不能下调，可导致细胞无限制的增殖，最后发展成为儿童期的恶性肿瘤。 自从1994年Kim等人建立敏感的端粒酶检测方法(TRAP-PCR)以来，发现85％-95％的常见恶性肿瘤显示端粒酶阳性。如：前列腺癌、乳腺癌、肺癌和胃肠道恶性肿瘤等，均有端粒酶活性的高表达，而且这种高表达与肿瘤的预后 有着密切的关系，认为端粒酶可以作为肿瘤的早期诊断和预后判断的生物学指 标，并看到了端粒酶在肿瘤治疗中的应用前景。近年来国内外有关于小儿常见 实体瘤中的神经母细胞瘤、肾母细胞瘤端粒酶活性的研究报道，这些研究结果 提示端粒酶在小儿恶性肿瘤的诊断和预后判断上有一定的临床意义。而对横纹 肌肉瘤和恶性畸胎瘤组织端粒酶活性的研究在国内还未见报道＊ 年，Hiyarna 等提出用细针穿刺乳腺癌组织进行端粒酶活性检测是可行的。而对肺癌、结肠 癌等脱落细胞行端粒酶活性检测，结果发现有比细胞学检测更高的敏感性，说 明对脱落细胞行端粒酶活性检测也有助于肿瘤的诊断。目前对小儿常见实体瘤 的穿刺活检细胞行端粒酶活性定性和定量的检测在国内外还未见报道。 研究目的 本研究拟通过 TMP－PCR银染定性法和 Telomerase PCR ELISA定量法对 小儿常见实体瘤组织的穿刺活检细胞行端粒酶活性定性和定量的检测，以探讨 穿刺活检细胞端粒酶活性检测在小儿肿瘤术前诊断和良恶性鉴别上的临床应用 价值。 材料和方法 本研究收集了 2000年 2月到 200年 12月问 3 8例穿刺活检细胞标本；其 中 34例为实体瘤（恶性实体瘤 20例，良性实体瘤 14例）和 4例正常肾组织， 均经组织病理学确诊。 对肿块穿刺完毕后，组织条和穿刺针反复在1刀ml生理盐水中洗涤，洗下 穿刺针上残留的细胞。组织条送病理学检查。洗涤液即送实验室离。0收集洗脱 细胞进行端粒酶 PCR模板制备，蛋白含量测定，端粒酶 PCR扩增。先取 5 v L PCR 产物变性、杂交、测吸光度，行端粒酶定量分析：剩余P＊R产物浓缩后行12％ 非变性聚丙烯酚胺凝胶电泳、银染，行端粒酶定性分析。 结果 1．spg是最合适的模板的蛋白浓度。 2．灵敏度检测结果：10个 K562细胞仍有较高的端粒酶活性（OD值 0．244）；4 个293细胞仍显示端粒酶阳性。 3端粒酶活性检测结果 门）．小儿实体瘤术前穿刺活检细胞的端粒酶活性检测结果与术前组织病理学检查 1 的结果有中度相关性（x乙17，尸＜0刀05：C＝ o．577人 但两者的结果无显著 性差异（X‘二0，P＞0刀5）。 O）．小儿恶性实体瘤组的端粒酶阳性率为 80％（ 6厘0＊活性水平（中位 OD值） 0．335；小儿良性实体瘤组的端粒酶阳性率为14．3％，活性水平0．043。小儿 恶性实体瘤组的端粒酶阳性率和活性水平均高于良性实体瘤组，差异均有显 著性意义（尸0．00和p＝3．796，P＜0刀005）。 （3．神经母细胞瘤6例，端粒酶阳性率为5历，活性水平（中位OD值）为0石引： 神经节细胞母细胞瘤1例门门），OD值为0．449；神经节细胞瘤2例（H）， OD值为0刀70。神经母细胞瘤组的端粒酶活性水平高于神经节细胞母细胞 瘤，更高于神经节细胞瘤。 K）．肾母细胞瘤组的端粒酶阳性率为 5历，端粒酶活性水平（中位 OD值）为 0．24， 两者均高于正常肾组织组（阳性率为0／4，活性水平0刀36），差异均有显著 性意义（P＜0．05和T＝ IO，P＜0刀05〕。 归）．恶性畸胎瘤组端粒酶阳性率为2八