牛磺酸对匹罗卡品致痫大鼠海马苔藓纤维出芽的影响

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目的:研究牛磺酸对匹罗卡品致痫大鼠海马苔藓纤维出芽的影响。方法:1、制作匹罗卡品癫痫动物模型。将致痫鼠随机分为三组,空白组、牛磺酸治疗组及治疗对照组,每组10只。2、牛磺酸治疗组于6天每天腹腔注射2g/kg牛磺酸。观察牛磺酸治疗组于不同时间点的痫性发作行为学改变,比较其痫性发作持续时间及发作分级的差异。行为学观察参照Racine发作分级标准,制订行为学观察表,观察造模后各组大鼠痫性发作行为表现,以造模后至首次出现Racine标准Ⅲ级以上发作时间计算潜伏期,分别记录大鼠面部阵挛、节律点头/甩尾、前肢阵挛、后肢站立/全身抽动、窜动/跌倒的次数。Ⅳ级以上大发作1h后腹腔注射10%水合氯醛(300mg/kg)终止发作,若注射水合氯醛30min后没有终止发作,予150mg/kg剂量重复注射至终止(以3次为最高限)。3、行为学观察结束后,观察致痫鼠海马组织中苔藓纤维出芽情况。Nissl染色:切片经二甲苯、梯度酒精脱脂至水,去离子水冲洗3min,1%甲苯胺蓝60℃C浸染30min,70%乙醇2min,95%乙醇分化(镜下控制,以尼氏小体显示清晰为度),无水乙醇快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。Timm染色:运用改良的Timm方法,切片依次浸入0.1%Na2S(溶于0.01mo1/L PBS),3%戊二醛各1h,然后再回到0.1%Na2S溶液浸泡1h。在暗室内将晾干的切片入新鲜配置Timm显色液中孵育30mmin,(显色液的配置:50%阿拉伯胶粉60mL,柠檬酸缓冲液10mL(pH=3),5.6%对苯二酚30mL,17%硝酸银1mL,硝酸银最后加入)。暗室中去离子水冲洗5min,再流水冲洗20min,苏木素复染15-30s,常规梯度脱水透明封片。实验数据采用SPSS17.0软件进行统计处理,结果以x±s表示,采用单因素方差分析比较组间差异,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、牛磺酸治疗组痫性发作持续时间及发作分级较空白组及治疗对照组降低。2、牛磺酸治疗组苔藓纤维出芽情况较空白组及治疗对照组评分低。结论:牛磺酸能减低癫痫发作的持续时间及发作分级,并对致痫鼠海马苔藓纤维出芽有干预作用。
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