黑果腺肋花楸种质资源的离体保存及果实花色苷的研究

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黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)为蔷薇科(Rosaceae)腺肋花楸属(Aronia)植物,落叶丛状灌木,树形小巧,叶片颜色随季节而变化,果实呈深蓝紫色,是具极观赏性的园林绿化树种;其果实中含有大量的花色苷,药用价值高。因此,黑果腺肋花楸是兼具观赏、生态、食用、药用的多功能树种,研究黑果腺肋花楸具有重要的理论和现实意义。东北地区的黑果腺肋花楸资源丰富、优质品种多,果实中花色苷含量高于其他地区,因此,将本土高含量花色苷的优良种质资源‘富康源Ⅰ号’通过离体保存的方式进行长期保留,为日后能更广泛引种、栽培花色苷含量高的品种,更便捷的获得更多花色苷做铺垫,本论文主要做了以下研究:采用延缓生长的离体保存法对高含量花色苷的黑果腺肋花楸资源进行保留,以达到延长继代保存时间的目的;采用超声波提取其果实中的花色苷并优化提取工艺,应用技术手段加大获取花色苷粗提物;利用高速逆流色谱分离纯化得到高纯度花色苷单体,将单体经过紫外可见光谱、高效液相色谱、高效液相色谱-质谱联用进行鉴别;最后,进行花色苷单体抗氧化活性和抑菌活性的研究,研究结果如下:1.建立并优化了黑果腺肋花楸离体培养的方法。以‘富康源Ⅰ号’试管苗为材料,探究不同浓度多效唑、甘露醇以及蔗糖对延长‘富康源Ⅰ号’试管苗保存的影响,结果表明:三者均能有效地限制生长,在单因素试验的基础上设计正交试验,得到最佳配方为:MS培养基、6 mg/L多效唑、10 g/L甘露醇、40 g/L蔗糖;在最佳培养基条件下对‘富康源Ⅰ号’试管苗保存,其存活时间可长达6-7个月,成活率可达67.4%。2.利用响应面法优化了果实花色苷提取工艺。研究表明:乙醇体积分数、超声功率、超声时间、液料比四个因素均对果实中花色苷提取产生影响。在单因素的基础上,建立四因素三水平的响应面模型,模型拟合得出各因素对提取量的影响大小情况依次为:超声功率(B)>乙醇体积分数(A)>超声时间(C)>液料比(D);最佳提取工艺参数为:乙醇体积分数56%、超声功率125 W、超声时间4 min、液料比20:1 m L/g,花色苷最大提取量为6.489 mg/g。3.分离并鉴定了三种黑果腺肋花楸花色苷单体。采用高速逆流色谱分离纯化花色苷单体,研究结果显示:采用正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-水-三氟乙酸=2:2:1:5:0.01为高速逆流色谱的溶剂体系,在转速900 rpm、检测波长510 nm的条件下,分离得到三个组分,通过紫外可见光谱、高效液相色谱、高效液相色谱-质谱联用进行分析鉴定,初步确定分别为矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和飞燕草素-3-O-葡萄糖苷。4.检测了黑果腺肋花楸花色苷单体的抗氧化与抑菌活性。对三种花色苷单体和粗提物进行体外抗氧化活性的测定,利用牛津杯法测定抑菌活性,结果表明:三种花色苷单体均可有效清除自由基;对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌等四种常见菌均有抑制作用,其中,飞燕草素-3-O-葡萄糖苷抑制效果最好,最小抑菌浓度均为0.313mg/m L。综上所述,黑果腺肋花楸是兼具观赏、生态、食用、药用的多功能树种,‘富康源Ⅰ号’是其高含量花色苷优质品种,对其进行保存可更好的获得更多花色苷;果实中的花色苷通过优化提取和纯化工艺,可增大花色苷的含量、提升纯度,增强抗氧化与抑菌活性。
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