【摘 要】
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[目的]牛奶过敏症的诊断治疗以及低/无过敏原配方奶研制的关键是牛奶过敏原组分的分离、纯化及标准化。本研究分离纯化出牛奶中引起过敏反应的致敏原组分,通过分析与组胺释放
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[目的]牛奶过敏症的诊断治疗以及低/无过敏原配方奶研制的关键是牛奶过敏原组分的分离、纯化及标准化。本研究分离纯化出牛奶中引起过敏反应的致敏原组分,通过分析与组胺释放的关系研究其免疫活性进而鉴定出牛奶主要过敏原组分,为研制适用于中国人的过敏原标准化疫苗提供依据。[方法]采用等电点沉淀、(NH4)2SO4盐析法、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等方法分离、纯化牛奶过敏原组分。分别以脱脂乳、乳清、酪蛋白和β-Lg免疫C57/BL6小鼠。免疫印迹分析牛奶致敏原组分。间接ELISA检测免疫小鼠血清中sIgE和sIgG;同时改良荧光法检测牛奶不同致敏原组分体外诱发96孔板内不同免疫原腹腔致敏C57/BL6小鼠MC组胺释放率。[结果]分离、纯化出酪蛋白、β-Lg、α-La等牛奶过敏原组分,纯度>90%。免疫印迹表明酪蛋白是牛奶主要致敏原组分。间接ELISA检测免疫C57/BL6小鼠血清中sIgE与sIgG;结果表明抗血清sIgG水平显著升高,sIgE水平低;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有相关性。脱脂乳中最主要的过敏原组分为酪蛋白,乳清中最主要的过敏原组分为β-Lg。组胺释放实验结果表明酪蛋白和β-Lg之间有重要的相似表位。[结论]组胺荧光检测法和sIgG水平可用于牛奶过敏原组分的鉴定和评价,为食物过敏原标准化提供研究方法。
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