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分子印迹技术是一种为获得与目标分子在空间结构和结合位点完全匹配的聚合物的制备技术。与天然受体相比,分子印迹技术制备的聚合物具有稳定性好、低成本、可重复使用等优点。近年来,有关小分子印迹技术取得了显著进展及广泛应用。然而,有关蛋白质生物大分子的研究,进展相对缓慢。究其原因,主要是由于蛋白质存在分子尺寸大、构象灵活、功能基团结构复杂、水溶性等特点,使得传统的小分子印迹技术推广到生物大分子存在固有的局限性。考虑到蛋白质的天然识别体系特征,本研究通过引入热敏单体制备了热敏性水凝胶、均相接枝共聚制备了壳聚糖凝胶及双功能单体联用制备了壳聚糖凝胶聚合物,考察了制备的聚合物凝胶吸附性能及分子特异识别性能,并对其应用于蛋白质分离识别领域做了初步探索。具体内容如下:(1)热敏水凝胶的制备及应用于牛血清蛋白的识别和分离研究以牛血清蛋白为模板,通过引入N-N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)热敏单体,分别在冰冻聚合(-20°C)及常温聚合(25°C)条件下,制备了热敏型分子印迹水凝胶。采用环境扫描电镜及红外光谱对制备的热敏水凝胶进行表征。比较考察了丙烯酰胺(AAm)和甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)两种结构功能单体,对热敏水凝胶的溶胀性能、温敏性能等进行了探究,并结合SDS-PAGE凝胶电泳技术对混合复杂样品的分离应用进行评价分析。实验结果表明,制备的热敏水凝胶对环境温度变化能产生敏感的刺激响应,冰冻聚合(-20°C)有利于形成三维互补孔穴网络结构,-20°C及25°C条件下制备的印迹水凝胶最大理论饱和吸附容量分别为95.97mg/g及82.58mg/g,平衡吸附时间为20h,平衡吸附浓度为2.0mg/mL,SDS-PAGE分析结果显示,制备的热敏水凝胶对模板蛋白牛血清BSA具有较好的亲和性,能特异性选择性识别混合样品中目标分子。(2)壳聚糖凝胶分子印迹聚合物识别卵清蛋白的研究以卵清白蛋白为模板,分别以丙烯酰胺(AAm)、丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸(MAA)、甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)为结构功能单体,采用均相接枝共聚制备了分子印迹壳聚糖凝胶聚合物。场发射扫描电镜表征了印迹与非印迹壳聚糖凝胶表观形貌差异,红外光谱表征了吸附前后红外吸收变化。考察了单体用量、交联度、聚合温度等因素对壳聚糖凝胶性能的影响。结合高效液相色谱分析(HPLC)探究了壳聚糖凝胶对目标分子的吸附性能及选择性识别性能。结果表明,以丙烯酰胺(AAm)和甲基丙烯酸(MAA)为结构功能单体制备的壳聚糖凝胶对模板蛋白具有较好的识别性能(IF分别为1.472和1.237),酸性聚合条件(pH=4.7)有利于分子印迹壳聚糖凝胶的制备,结合蛋白前后红外光谱吸收变化及Zeta电位分析证实氢键及静电键合作用力的存在。HPLC分析结果显示,即使在竞争蛋白lysozyme的存在下,分子印迹识别位点仍对模板保持良好的选择性。(3)双功能单体壳聚糖凝胶分子印迹聚合物的制备及性能研究以卵清蛋白为模板,丙烯酰胺(AAm)和甲基丙烯酸(MAA)为结构功能单体,2-丙烯酰胺-2-甲基-1-丙烷磺酸(AMPS)为配位功能单体,采用联用共聚制备了双功能单体壳聚糖凝胶。考察了单体配比、交联度等因素对壳聚糖凝胶性能的影响。探究了双功能单体壳聚糖凝胶对目标分子的吸附性能及竞争选择性性能。结果表明,功能单体AAm(MAA)与AMPS最佳配比为10:1时,制备的双功能单体壳聚糖凝胶平衡吸附时间为22h,平衡吸附浓度为1.5mg/mL,竞争蛋白lysozyme浓度的变化对双功能单体壳聚糖凝胶的选择性识别性能影响不大。