目的:肠黏膜屏障是指当肠道中的危害性物质经过肠道黏膜,侵入机体中肠以外的组织或血液时,肠道中能阻止该过程的存在。乙醇可通过氧化应激、内毒素血症、细胞因子、免疫调节等多个环节破坏肠黏膜屏障功能。Rho作为一种小分子G蛋白,它有一个下游效应体Rho相关蛋白激酶（Rho associated kinase,ROCK）,ROCK目前有ROCK1与ROCK2亚型。Rho/ROCK是一种机体中常见的信号通路,激活该通路能促进炎症的产生。核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）是调控大量炎性因子的关键性转录因子。有研究表明Rho A/ROCK是调控NF-κB的一个上游信号。因此,ROCK可能通过激活NF-κB来加速肠屏障功能障碍的发生发展过程。水通道蛋白（Aquaporin,AQP）是哺乳动物中同源的水转运蛋白家族,而今已有12种（AQP0-12）被发现。其中,AQP8表达于十二指肠组织、空肠和结肠组织中,它与消化系统的水代谢紧密相关,可能在乙醇诱导的肠道屏障功能障碍中起关键作用。本研究的目的在于探索ROCK/NF-κB/AQP8信号活化参与乙醇诱导肠黏膜屏障功能障碍的过程。方法:本实验包括7组,分别为正常对照组（Control组）、Et OH组、Et OH+NC组、Et OH+ROCK1 siRNA组、Et OH+ROCK2 siRNA组、Et OH+ROCK1+ROCK2 siRNA组、Et OH+PDTC组。Et OH组大鼠按10g/kg体重/天的35%（v/v）乙醇双蒸馏水灌胃2周。此后,给药量增加到14g/kg体重/天,并持续给药10周。按照分组情况,给予相应的慢病毒干扰处理。建立大鼠肠黏膜屏障功能障碍模型,收集大鼠尿液,检测亚硝酸盐和NO浓度,验证肠黏膜通透性的改变。采用湿/干比重法计算结肠组织的含水量。采用H&E染色法观察各组中结肠黏膜病理学变化。应用Real-time PCR法、Western blot法检测各组结肠黏膜ROCK1、ROCK2、NF-κB、AQP8的mRNA和蛋白表达。应用电泳迁移率变动分析法（Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA）检测各组结肠黏膜NF-κB的结合活性。应用免疫组化法检测各组结肠黏膜ROCK1、ROCK2、NF-κB的表达。应用免疫荧光法检测各组中AQP8的表达。结果:1、正常对照组中结肠黏膜形态良好,无异常。长期乙醇暴露可显著增加大鼠结肠黏膜的通透性,增加大鼠尿液中亚硝酸盐和NO含量,明显破坏结肠黏膜的结构,使含水量显著高于正常组。干扰ROCK1和/或ROCK2或抑制NF-κB可部分保护结肠黏膜的组织结构,抑制乙醇诱导的结肠组织含水量的增加。与其他处理组相比,Et OH+ROCK1+ROCK2 siRNA组和Et OH+PDTC组的保护作用更为显著。2、正常对照组中ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达较低,乙醇诱导了ROCK1和ROCK2表达的显著增加。而乙醇诱导的ROCK1和ROCK2表达上调的部分受到siRNA干扰的抑制。特异性干扰ROCK1也能部分抑制乙醇诱导的ROCK2的增加,特异性干扰ROCK2也能部分抑制乙醇诱导的ROCK1的增加,其中,同时干扰ROCK1和ROCK2的效果尤为显著。3、NF-κB mRNA水平在各组间无显著差异。正常对照组中NF-κB蛋白表达强度较弱,Et OH组中NF-κB表达较强的棕黄色信号,干扰ROCK1和/或ROCK2或抑制NF-κB可部分保护肠黏膜的组织结构,蛋白表达强度减弱。乙醇降低了NF-κB p65在细胞质中的蛋白表达,升高了其在细胞核中的表达。然而,干扰ROCK1和/或ROCK2以及抑制NF-κB可以对NF-κB p65由细胞质向细胞核的转移进行抑制。乙醇还可激活NF-κB p65的活性,并通过干扰ROCK1和/或ROCK2或抑制NF-κB来抑制NF-κB的活性。4、AQP8主要表达于细胞膜,正常对照组表达量最高。Et OH组AQP8的mRNA和蛋白表达量明显低于正常对照组。干扰ROCK1和/或ROCK2或抑制NF-κB可部分恢复乙醇诱导的AQP8 mRNA和蛋白的表达水平的降低。与其他处理组相比,Et OH+ROCK1+ROCK2 siRNA组和Et OH+PDTC组的恢复作用更为显著。结论:在乙醇诱导的肠黏膜屏障功能障碍大鼠模型中,ROCK/NF-κB/AQP8信号活化参与了乙醇诱导肠黏膜屏障功能障碍的过程。