三年桐（Verniciafordii）为大戟科油桐属植物,是重要的木本工业用油树种,其种仁富含油脂,含油率40%-70%。从种仁中提取的油脂称为桐油,作为优质的干性油,可用于生产桐油环保油漆。然而三年桐缺乏高产单株,难以满足市场对桐油的需求,严重制约了桐油产业的发展。基于三年桐分子遗传改良的手段培育高产三年桐单株,是解决桐油产量低的有效途径。本论文利用发根农杆菌K599菌株,首次建立了三年桐转基因不定根诱导的遗传转化技术。该技术可为油桐功能基因的挖掘鉴定提供便捷平台,有利于今后油桐分子育种工作的快速开展。本论文的主要研究结果如下:1.三年桐不定根遗传转化技术的建立。我们以油桐基地混收的三年桐种子萌发幼苗为研究对象。基于冻融法获取含pSAK277-RFP质粒（含红色荧光蛋白报告基因）的发根农杆菌K599,利用该菌株制备侵染菌液,体外直接注射三年桐幼嫩茎段。培养2个月后利用双荧光蛋白观测灯快速锁定转基因不定根,并进一步在DNA、RNA水平鉴定和激光共聚焦显微镜观察后验证转基因不定根的真实性。基于50株三年桐幼苗处理结果发现:1)该技术转基因不定根转化效率为13.96%;2)注射部位持续保湿是不定根成功诱导的关键因素;3)菌液OD值、三年桐苗龄、注射部位均可能影响转基因不定根转化效率。2.三年桐不定根遗传转化技术的优化。从菌液浓度OD600值（0.05、0.1、0.2、0.3）、幼苗年龄（14 d、21 d、28 d、35 d苗龄）、茎干颜色（绿色、红色）和注射部位（距根0-2 cm、2-4 cm、4-6 cm、6-8 cm）设置梯度试验进行优化。结果表明:OD600为0.2时转基因不定根诱导率最高（18.15%）,21天苗龄植株的转基因不定根诱导率最高（15.94%）,注射位置距根6-8 cm时转基因不定根诱导率最高（13.96%）。综上,选择用OD600为0.2的发根农杆菌K599注射侵染21天苗龄的三年桐幼苗距根6-8 cm的茎段位置,可使转基因不定根诱导率提高到18.61%。3.三年桐不定根再生体系的探究。为了获取转基因的三年桐植株,我们尝试利用转基因不定根建立再生体系。因目前尚未解决实生苗转基因根组培污染率高的难题,所以改用无菌苗根探究根再生体系。目前的研究结果如下:1)用0.1%升汞消毒种子8 min,种子污染率为7.73%;2)以三年桐无菌根为外植体,通过设置植物激素浓度梯度发现确定三年桐根最佳愈伤诱导组合为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D 或 1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D 愈伤诱导率最高,为50%以上;3)基于三年桐根获取的愈伤组织,我们尝试了不同的激素组合诱导分化,目前未获取可促使愈伤分化为芽的激素组合。综上所述,本论文首次建立一种简单快速获取三年桐转基因不定根的遗传转化技术。团队其他成员将继续开展转基因不定根再生为完整转基因植株的研究工作。