重组酿酒酵母共培养直接发酵蔗渣产乙醇的统合生物工艺研究

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降解纤维素生产燃料乙醇作为替代石油的能源,是目前应对能源危机的一个热点方向。蔗渣来源丰富、价格低廉,作为燃料乙醇的原料,具有极大的应用开发前景。本论文利用三种分泌纤维素酶的重组酿酒酵母,建立发酵蔗渣纤维素生产燃料乙醇的统合生物工艺(consolidated bioprocessing,CBP),并对该工艺进行优化,研究其生产乙醇的效率。三种重组酿酒酵母分别表达绿色木霉的内切葡聚糖酶eg3、外切葡聚糖酶cbh2和β-葡萄糖苷酶bgl1。在等比例混合培养条件下EGIII、CBHII和BGLI的最高酶活分别为0.445IU/mL、0.016IU/mL和0.732IU/mL;三种纤维素酶的综合酶活(滤纸酶活)在培养96h后达到最高为0.083IU/mL。为优化发酵工艺,论文研究了蔗渣不同粉碎程度、发酵培养基组分以及三种酵母不同接种比例对乙醇产率的影响。结果表明,乙醇产率随粉碎程度提高,但从能耗和乙醇产率的平衡考虑,本研究选择200目的蔗渣作为发酵原材料;通过L9正交试验发酵培养基的最佳组分浓度分别为:蔗渣150g/L、玉米浆28g/L、(NH4)2SO47g/L、KH2PO44g/L;不同比例配比的结果显示,当EGIII:CBHII:BGLI粗酶液比例为1:3:2时综合酶活最高。根据上述优化的条件,分别以等比例接种和1:3:2比例接种,进行CBP发酵实验,发酵体系为3L。结果显示,后者的乙醇产率较高为20.26g/L,占理论值的59.6%,比等比例接种的产率(17.11g/L)高3.15g/L。蔗渣纤维素利用率为74.1%,高于等比例接种的62.5%。综上所述,本论文成功构建了重组酿酒酵母混合共发酵蔗渣纤维素生产燃料乙醇的CBP工艺。但乙醇的产率仍有进一步提高的可能。
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