凝结芽孢杆菌检测方法的优化及在仔猪细菌性腹泻临床应用效果研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lantaiwin
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凝结芽孢杆菌具有促进营养物质吸收和改善肠道微生物菌群结构等生物学特性,作为饲料添加剂广泛应用于动物生产中。然而由于凝结芽孢杆菌检测中存在的产品质量良莠不齐、缺少权威标准等问题限制了其应用。本研究在前期工作的基础上,从培养基成分和p H值、培养温度及培养时间等方面优化饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测方法,促进凝结芽孢杆菌在动物饲料添加剂中的应用和推广;并以腹泻仔猪为试验对象,通过仔猪饲喂试验,检测不同剂量凝结芽孢杆菌复合制剂对仔猪生产性能、肠道发育状况及肠道菌群结构的影响,以期明确凝结芽孢杆菌复合制剂在仔猪生长过程中的最佳添加剂量和临床作用,获得了以下试验结果:(1)运用革兰氏染色镜检、生化实验和特异性PCR扩增对凝结芽孢杆菌进行了鉴定,分离纯化的菌株均为凝结芽孢杆菌。(2)通过筛选和比较最终确定使用p H5.5的添加0.04%溴甲酚紫的自制改良营养琼脂培养基,在50℃下培养24 h进行凝结芽孢杆菌的平板计数是最优的检测条件和方法,准确度和检测效率高于其它商品化培养基和检测方法。(3)通过对腹泻仔猪的血清及粪便样品进行PCR检测发现致病性大肠杆菌和沙门氏菌是引起仔猪细菌性腹泻的主要病原菌。(4)将60头28日龄、平均体重为6.67±0.24 kg的腹泻仔猪分为4个组,饲养30天,其中A组为市售普通微生物产品组,B组饲料中添加高剂量凝结芽孢杆菌(添加量1000亿/吨),C组饲料中添加低剂量凝结芽孢杆菌添加量(添加量200亿/吨),D组为空白对照组。相比较对照组,市售普通微生物产品组提高了腹泻仔猪的平均日增重和平均日采食量。添加高剂量凝结芽孢杆菌后,血清中Ig A、Ig M与Ig G含量均明显升高,凝结芽孢杆菌可以促进机体产生免疫球蛋白抗体的分泌。与空白对照组或市售普通微生物产品组相比,凝结芽孢杆菌添加组(B组、C组)中玉米赤霉烯酮及黄曲霉毒素B1含量均明显降低,呕吐毒素及T2D毒素含量变化不明显。(5)连续30天在腹泻仔猪日粮中添加凝结芽孢杆菌,使肠道内物种丰度升高且乳酸杆菌等有益菌种类增多,且凝结芽孢杆菌高剂量添加组(添加量1000亿/吨)中各种功能蛋白丰度较均一,表明凝结芽孢杆菌能够调节肠道内微生物菌群平衡,保障各种功能蛋白的表达。(6)饲料中添加凝结芽孢杆菌(添加量1000亿/吨),能够显著提高猪十二指肠绒毛高度以及绒毛高度/隐窝深度的比值。综上所述,本研究优化了凝结芽孢杆菌平板计数的方法,提高了检测效率和准确性;研究表明在腹泻仔猪的基础日粮中长期添加凝结芽孢杆菌复合制剂能够提高腹泻仔猪的生产性能调节肠道微生物菌群,促进肠道发育。
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