猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)在分类学上属于圆环病毒科圆环病毒属,它是一种直径17 nm、呈20面体对称结构,衣壳内包裹着大约1.76 kb单链环状DNA的病毒。断奶仔猪多系统衰竭综合征是由猪圆环病毒2型(PCV2)为主要病原体引起的一种严重猪疾病,给养猪业带来了巨大的经济损失,猪圆环病毒疫苗的研发将会对养猪业产生巨大的经济效益。PCV2的开放阅读框2(ORF 2)主要编码病毒的结构(Cap)蛋白,结构蛋白构成PCV2的核衣壳,能诱导动物机体产生特异性免疫应答,也是免疫保护的主要抗原。体外表达地PCV2-Cap蛋白可以自发组装成病毒样颗粒(VLPs),VLPs具有良好的安全性和刺激机体产生强烈的免疫反应,因此被广泛的用作疫苗研发。利用大肠杆菌表达系统,表达出利用生物信息学手段优化的PCV2ΔCap42—233蛋白。包涵体表达的PCV2ΔCap42—233蛋白利用高浓度变性剂(尿素)溶液进行溶解、变性,然后利用Ni2+亲和层析柱对其进行分离纯化,得到电泳纯级别的PCV2ΔCap42—233蛋白。采用分布梯度透析法去除变性剂,得到水溶性的PCV2ΔCap42—233蛋白。随后更换缓冲液的成分,得到类似病毒样颗粒的PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒。甘露糖受体是免疫系统中抗原递呈细胞表面受体家族成员,它增加抗原递呈细胞对抗原的加工、呈递作用,达到刺激机体产生更强免疫反应的效果。甘露糖化抗原可以靶向甘露糖受体从而刺激产生更高效的免疫反应。利用高碘酸钠将甘露聚糖在一定条件下进行氧化,促使甘露聚糖在主要结构完整的情况下糖链上部分单糖开环,形成含有两个醛基的结构。然后将氧化后甘露聚糖和具有病毒样颗粒类似结构PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒按一定比例进行希夫碱反应,得到多糖和蛋白共价结合的甘露聚糖化PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒。然后利用含有希夫碱键分子在酸性条件下易发生可逆反应,验证溶酶体偏酸性环境pH=5.0时甘露糖聚糖化纳米颗粒解离的能力。因此,甘露聚糖化PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒既具有了识别抗原递呈细胞上甘露糖受体能力,又具备pH响应动态共价键控制的门控开关纳米载药系统,这样的双重效果将会增强PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒刺激机体产生的免疫效果。将PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒和甘露聚糖化PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒制备出不同剂型的亚单位疫苗,构建SPF级小鼠免疫模型,然后分别对小鼠体内PCV2抗体、IL-4、IL-2、IFN-γ进行测定,结果证明,靶向抗原递呈细胞甘露聚糖化PCV2ΔCap42—233蛋白纳米颗粒显著增强小鼠针对PCV2抗原的体液免疫反应。