巫山淫羊藿组织培养研究

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巫山淫羊藿是我国传统的药用植物,收载于2010年版《中国药典》,已有2000多年的用药历史。研究表明巫山淫羊藿有明显的生理活性和药理作用,具有很大的开发价值。目前,对巫山淫羊藿组织快繁的研究报道较少。利用生物技术手段繁育巫山淫羊藿,可以在较短的时间内获得大量的种苗,对于保护巫山淫羊藿野生资源、保证药源,实现其可持续利用都有十分重要的意义。本文通过研究巫山淫羊藿不同外植体消毒方法、愈伤组织诱导与分化、丛生芽诱导与增殖、试管苗生根等方面,探讨了巫山淫羊藿组培快繁的技术方法。主要研究结果如下:(1)外植体选择与表面灭菌:巫山淫羊藿叶片、总叶柄顶端、芽和种胚为初代启动培养的最佳外植体。外植体最佳消毒方法为75%酒精消毒30s,再用0.1%HgCl2消毒,分别为叶和总叶柄顶端消毒各6min,芽连续两次消毒(4+2)min,污染率可控制在5%以内,存活率在75%以上。种子接种前用0.1%HgCl2消毒2min,存活率为50%。(2)愈伤组织诱导:愈伤组织诱导中,2,4-D和IBA达到了极显著水平;各种外植体诱导效果依次为总叶柄顶端、叶片、种胚,但叶和总叶柄顶端诱导的愈伤组织不易分化且后期发生褐化;叶诱导愈伤组织时WPM培养基比MS、B5、N6更适宜愈伤组织诱导和生长,降低褐化率;种胚诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D2mg·L-1+IBA2mg·L-1+NAA0.5mg·L-1;叶诱导愈伤组织最佳培养基为WPM+2,4-D2mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1,诱导率为79.2%。(3)愈伤组织分化:在愈伤组织分化中,6-BA和NAA达到了极显著水平;种胚愈伤组织易分化出芽,而叶和总叶柄顶端诱导的愈伤组织没有分化出芽。种胚愈伤组织分化的最佳培养为MS+6-BA1mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+IBA1mg·L-1,分化率为73.3%。(4)丛生芽诱导与增殖:以巫山淫羊藿的种胚和芽为外植体进行离体培养,均可直接诱导出芽。芽诱导最佳培养基为WPM+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+GA30.5mg·L-1,诱导率为75.5%,诱导芽过程WPM培养基和6-BA达到极显著水平;种胚诱导芽时6-BA起到了决定作用,且诱导率与生长素和细胞分裂素的比值有密切关系,种胚诱导芽最适培养基为MS+IBA2mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1,诱导率为77.8%。细胞分裂素浓度对丛生芽增殖起决定作用,丛生芽增殖的适宜培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1,增殖系数为2.17。(5)生根培养:最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg·L-1+0.05%活性炭,此时生根率为90%,每株3-6条根,且苗生长健壮。
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