【摘 要】
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目的:鼻咽癌是一种来源于人鼻咽上皮的实体肿瘤,咽隐窝是鼻咽癌的好发部位。TRPV4是一种非选择性阳离子通道,多项研究可知TRPV4在多种肿瘤中的异常表达,并参与调节肿瘤细胞增殖、转移及上皮间质转化等过程。本课题将试图探究鼻咽癌中TRPV4中的表达状况,初步研究TRPV4在体外水平对鼻咽癌细胞的增殖、迁移等生物学行为的影响,为鼻咽癌临床治疗提供新思路。方法:观察鼻咽正常上皮细胞系NP69,以及鼻咽癌
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目的:鼻咽癌是一种来源于人鼻咽上皮的实体肿瘤,咽隐窝是鼻咽癌的好发部位。TRPV4是一种非选择性阳离子通道,多项研究可知TRPV4在多种肿瘤中的异常表达,并参与调节肿瘤细胞增殖、转移及上皮间质转化等过程。本课题将试图探究鼻咽癌中TRPV4中的表达状况,初步研究TRPV4在体外水平对鼻咽癌细胞的增殖、迁移等生物学行为的影响,为鼻咽癌临床治疗提供新思路。方法:观察鼻咽正常上皮细胞系NP69,以及鼻咽癌细胞系HNE1、C666-1、CNE1和CNE2中TRPV4的表达,再进一步研究TRPV4对鼻咽癌Ca2+调控的功能以及对细胞的增殖、迁移、NFAT1的核表达等行为的影响。（1）RT-qPCR实验:提取五组细胞系中的总RNA后,再进行RT-PCR反转录实验,利用得到的c DNA,进行qPCR检测,观察TRPV4在鼻咽正常上皮细胞系NP69,以及鼻咽癌细胞系HNE1、C666-1、CNE1和CNE2中的表达情况。（2）钙成像实验:用TRPV4选择性拮抗剂HC067047（1μM）预处理,然后加入TRPV4选择性激动剂GSK1016790A（100n M）刺激,观察TRPV4调控鼻咽癌细胞Ca2+内流的功能。（3）CCK-8方法:分为实验组和对照组,实验组中加入TRPV4特异性抑制剂HC067047 1μM;对照组中加入0.1%DMSO,利用CCK-8试剂盒,检测两组细胞的增殖能力。（4）Transwell迁移实验:采用Transwell迁移实验来检验,抑制TRPV4的活性对细胞迁移的影响。（5）Western blot方法:提取细胞核蛋白,应用Western blot方法来检验抑制TRPV4活性及清除Ca2+对NFAT1核表达的影响。结果:1.RT-qPCR实验结果显示在鼻咽癌细胞中TRPV4高表达。2.钙离子成像实验表明TRPV4为鼻咽癌细胞中功能性钙离子通道蛋白。3.CCK-8实验显示:抑制TRPV4活性显著降低了鼻咽癌细胞的生长。4.Transwell迁移实验显示:抑制TRPV4的活性可降低鼻咽癌细胞的迁移能力。5.Western blot实验显示:抑制TRPV4的活性或清除Ca2+可降低NFAT1的核表达。结论:1.鼻咽癌细胞中高表达TRPV4 mRNA。2.抑制TRPV4的活性能够降低鼻咽癌细胞的增殖、迁移。3.在鼻咽癌细胞中的TRPV4为功能性钙离子通道蛋白,能够介导钙离子内流。TRPV4可激活NFAT1的核表达。
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