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溴代阻燃剂(BFRs)由于具有良好地阻燃性,广泛应用于各种商业产品,如电脑、手机、电视、地毯、家具、绝缘板、床垫和聚合物泡沫材料等。四溴双酚-A(TBBPA)是应用最广,全球产量最大的一种阻燃剂。TBBPA可由生产使用以及废弃物处理等过程进入环境中,目前已在污水污泥、水生动物和人体血清样品中检测到这些物质。因此,由TBBPA引发的生态安全和环境污染问题越来越受到人们关注。活体研究实验表明,TBBPA会抑制大鼠细胞膜对神经递质(包括多巴胺、谷氨酸和γ-氨基丁酸)的吸收,进而对大鼠产生神经毒性。目前TBBPA的毒性研究主要集中在动物的神经行为,认知功能等宏观方面,对于TBBPA的毒性效应及其致毒机理尚未进行深入研究。毛细管电泳(Capillary Electrophoresis, CE)是离子和荷电粒子以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,根据样品中各组分之间的迁移速率的差异而实现高效、快速分离的一种新型液相分离技术。毛细管电泳以其快速、高效、经济、环保等优点,逐渐成为分离科学中最有发展前景的研究领域之一,研究广泛应用于食品科学、生物医学、分析化学、环境科学等领域。毛细管电泳可与多种检测技术联用,研究表明,激光诱导荧光检测器是其中灵敏度最高的检测器之一,具有极高的灵敏度和分离效率,非常适合生物样品的分析。根据上述研究现状,本文建立了用于快速、准确检测单胺类神经递质、氨基酸和脑啡肽等物质的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法;并应用于TBBPA暴露后的SD大鼠脑部各区域中相关神经递质的含量变化,初步探讨了TBBPA对生物体的神经毒性。本论文主要分为以下四部分:1绪论(第一章)首先,对溴系阻燃剂的污染现状及其毒性效应进行了综述;其次综述了毛细管电泳的发展历史、基本原理、分离模式、联用检测技术、应用领域;再次,分别阐述了单胺类神经递质、氨基酸和脑啡肽等生物活性分子在生命活动中的重要意义。最后提出本论文的研究目的和意义。2毛细管电泳激光诱导荧光检测对单胺类神经递质分析的方法研究及其在TBBPA暴露下对大鼠脑部单胺类神经递质含量影响的应用(第二章)单胺类神经递质,如5-HT、NE和DA,是一类具有广泛生物活性的物质,在中枢和周围神经系统中具有非常重要的作用,也是研究最多的神经递质。然而由于单胺类神经递质在脑部或者血浆中的含量极低、自身生物结构相似、性质不稳定易被氧化导致对它们的准确测定有一定难度。因此建立一种快速、灵敏的单胺类神经递质检测方法,对于神经生理学、临床医学等多学科来说都具有重要的意义本部分以CFSE为荧光衍生试剂,建立了用于同时分离检测5-羟色胺(serotonin,5-HT)、去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)和多巴胺(dopamine, DA)、的毛细管电泳激光诱导荧光检测法。对待测物的衍生条件和分离条件如缓冲溶液的pH和浓度、衍生试剂比例、进样时间、分离电压等影响分离测定的因素进行了优化,并获得最佳测定条件。在最优条件下,三种物质在14分钟内实现分离并检测,并且在各自的线性范围内,荧光强度与浓度呈良好的线性关系,线性相关系数达到0.9997以上,检出限分别为2.0×10(-9),5.0×10-(10),以及1.0×10(-9)mol/L(S/N=3)。并将该方法用于测定SD大鼠受TBBPA损伤后脑部各区域5-HT、NE和DA含量的变化,探讨其可能的毒理效应,为深入研究溴代阻燃剂对动物体的毒性及评价提供一种灵敏、有效的方法。3毛细管电泳激光诱导荧光检测对氨基酸类神经递质分析的方法研究及其在TBBPA暴露下对大鼠脑部氨基酸类神经递质含量影响的应用(第三章)氨基酸是构成蛋白质分子的基本单位,与生物体的一切生命活动息息相关。在氨基酸不仅是蛋白质合成的重要原料,而且为机体的生长发育,新陈代谢等生命活动正常运行提供了物质基础。因此当人体内的氨基酸的含量降低或缺乏时,机体将无法进行正常的新陈代谢,最终会导致各种疾病的发生或死亡本部分以5(6)-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)为荧光衍生试剂,建立了用于同时分离检测赖氨酸(lysine, Lys)、谷氨酰胺(glutamine, Gln)、γ-氨基丁酸(GABA)、L-丝氨酸(L-serine, L-Ser)、丙氨酸(alanine, Ala)、牛磺酸(taurine, Tau)、谷氨酸(glutamate, Glu)、天门冬氨酸(asparaginic acid, Asp)的毛细管电泳激光诱导荧光检测法。对氨基酸的衍生条件和分离条件如pH和浓度、衍生试剂比例、进样时间、分离电压等影响测定的因素进行了优化,并获得最佳测定条件。Lys、G1n、GABA、L-Ser、Ala、Tau、 Glu和Asp八种氨基酸类神经递质在含5%乙腈(v/v),10mmol/L SDS的pH为10,浓度为70mmol/L硼砂盐缓冲体系中得到完全分离,检测限分别为0.23,0.59,0.34,1.1,5.9,4.1,5.3和8.8nmol/L(S/N=3)。并将该方法用于检测经TBBPA染毒后的SD大鼠脑部各区域中Lys、G1n、GABA、L-Ser、Ala、Tau、Glu和Asp含量的变化,探讨其可能的毒理效应,为深入研究溴代阻燃剂神经毒性及评价提供了一种灵敏、有效的方法。4毛细管电泳激光诱导荧光检测对脑啡肽分析的方法研究及其在TBBPA暴露下对大鼠脑部脑啡肽含量影响的应用(第四章)脑啡肽类物质(ENK)在体内广泛分布,作为一种神经递质和神经调质,功能复杂、涉及机体许多生理活动的调节,已经引起广泛关注。本部分以异硫氰酸荧光素(FITC)为荧光衍生试剂,建立了用于同时分离检测亮氨酸脑啡肽(L-ENK)和甲硫氨酸脑啡肽(M-ENK)的毛细管电泳激光诱导荧光检测法。对实验的衍生条件和分离条件如缓冲溶液的pH和浓度、衍生比例、进样时间、分离电压等影响分离检测的因素进行了优化,并获得最佳测定条件。在最优条件下,甲啡肽和亮啡肽在15分钟内实现分离检测,并且在5.0-5.0×103nmol/L的浓度范围内与荧光强度呈良好的线性关系,线性相关系数达到0.9999以上。L-ENK和M-ENK检出限分别为1.7×10(-9)和3.3×10(-9) mol/L(S/N=3)。并将该方法用于检测经TBBPA染毒后的SD大鼠脑部L-ENK和M-ENK含量的变化,探讨其可能的毒理效应,为深入研究溴代阻燃剂神经毒性及评价提供了一种灵敏、有效的方法。