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甲状旁腺激素(parathyroid hormone, PTH)是尿毒症的主要毒性物质之一,几乎所有的肾衰竭患者体内含有过高的PTH,过高的PTH使肾衰竭患者处于一种高危状态,严重影响肾衰竭患者生存质量及生存率。目前针对高PTH的治疗方法包括3种：药物治疗、外科手术和血液净化。药物和手术治疗易复发,且具有较大副作用。血液净化方式被认为是一种有效的、很有发展前景的治疗方式。已有的血液净化疗法对PTH的去除能力有限且选择性低。为了提高吸附剂的选择性和安全性,本论文利用稳定性高,安全性好的特异性IgY为配基,制备了以人PTH为目标分子的免疫吸附剂并考察该吸附剂对PTH的吸附能力。本论文的研究内容包括以下几部分：(1)PTH的原核表达。通过基因工程技术,分别构建了重组质粒pET23a-PTH、 pET21b-PTH; PTH在含有pET23a-PTH和pET21b-PTH的E.coli BL21(DE3)中均获得可溶表达,其中E.coli BL21(DE3)-pET23a-PTH的表达量高,因此选择pET23a-PTH作为目的蛋白表达的重组质粒。通过对菌体的培养条件的优化,确定了最终的培养条件为：菌体37℃活化过夜后,1%接菌于50mL LB培养基,培养3h后,0.1mMIPTG诱导继续培养4h,目的蛋白表达量约为0.1mg/mL,达到总蛋白的30%。(2)PTH的纯化。菌体经冰浴超声破碎,0.12%(w/v) PEI沉淀,50%饱和度的硫酸铵沉淀,pH3.5柠檬酸缓冲液等电点沉淀,SP强阳离子交换层析得到终产品。终产品经SDS-PAGE SEC-HPLC及RP-HPLC检测,纯度达到95%以上。对终产品进行了鉴定分析,MALDI-TOF-MS测得分子量为9406.777Da,与理论分子量基本一致,免疫荧光检测发现其具有良好的免疫原性。(3)PTH免疫吸附剂的制备。将获得的PTH终产品作为抗原免疫蛋鸡,经Western blot和间接ELISA检测所获卵黄内产生较高效价IgY特异性抗体；IgY经去除脂质,硫酸铵沉淀等步骤初分离后,利用Sepharose-PTH免疫亲和柱进行亲和纯化,纯度达92%；将纯化得到的抗-PTH IgY固载于羰基二咪唑(N, N’-carbonyldiimidazole, CDI)活化的琼脂糖凝胶上制备免疫吸附剂,吸附剂对各肾衰竭患者血清样品中的PTH均有良好去除效果,去除率为40-60%。总之,通过本论文的研究,获得了对肾衰竭患者血清中PTH具有良好去除效果的免疫吸附剂,为其作为血液净化装置的吸附填料用于患者血液中甲状旁腺激素的清除奠定了良好基础。