在真核生物中,蛋白激酶参与调节细胞功能的许多关键方面,包括细胞分裂、细胞代谢和对外界信号的反应等。钙依赖蛋白激酶CPKs/CDPKs(Ca2+-dependent protein kinases)是一类依赖Ca2+的蛋白激酶,是植物和某些原生动物Ca2+信号转导过程中主要的传递者,能识别发育和环境刺激引发的Ca2+信号,将其转化为蛋白质磷酸化事件。在植物中,CPKs/CDPKs是一个多基因家族,其调控机制非常复杂。近年来,对植物CPKs/CDPKs在免疫和应激信号网络中触发多样的下游反应的功能有很多研究,但其活力调控机制仍不清楚。本论文对拟南芥钙依赖蛋白激酶(AtCPKs)和原生动物弓形虫CDPK1(TgCDPK1)的活力调控机制进行了初步研究。CPKs/CDPKs大多由N端可变区域、丝/苏氨酸激酶结构域KD(Kinase Domain)、连接区域J(Junction)以及C端的类钙调蛋白结构域CLD(Calmodulin-like Domain)构成。不同亚组的AtCPKs基因由拟南芥cDNA文库克隆获得,TgCDPK1基因经密码子优化后合成。在此基础上,我们克隆了多个AtCPKs及TgCDPK1的全长和不同片段,在大肠杆菌体系中表达,经过一系列的纯化步骤,获得高浓度、高纯度的重组蛋白。运用NADH-LDH偶联酶测活方法和蛋白印迹法,我们得到以下初步结果:1)由大肠杆菌表达体系获得的AtCPKs和TgCDPK1重组蛋白具有蛋白激酶活力,且有磷酸化丝/苏氨酸信号;2)拟南芥不同亚组的AtCPKs对Ca2+的依赖性不同;3)比较磷酸化和去磷酸化状态AtCPKs的激酶活力,发现磷酸化对AtCPKs活力没有影响;4)测定AtCPK3、AtCPK4及TgCDPK1不同片段的活力,发现拟南芥CPK-KD有活力,但KD+J没有活力,而TgCDPK1的KD和KD+J片段均没有活力,说明AtCPKs和TgCDPK1的活化调控机制可能存在很大差异;5)开展AtCPKs的结构生物学研究,尝试阐明拟南芥CPKs活力调控的分子机制。