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目的构建耐5-FU的胃癌耐药细胞株,并初步探讨细胞发生5-FU耐药的可能机制。方法通过药物耐药间歇冲击并浓度梯度递增法诱导建立胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU;应用MTT法检测亲代细胞对4种化疗药物的IC50并计算耐药指数(RI),通过MTT法绘制细胞的生长曲线计算细胞倍增时间；流式细胞仪分析细胞周期分布；RT-PCR检测抑癌基因P53、癌基因Bcl-2、促凋亡基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、死亡相关蛋白激酶(Death associated protein kinase, DAPK)家族成员中的(DAPK-1、DAPK-2、 DAPK-3).多药耐药蛋白(Multidrug resistance proteins, MRP)亚家族中的MRP-6、多药耐药基因1(Multidrug resistance1, MDR1)、切除交叉互补修复基因(Excision repair cross-complementing1, ERCC-1)的表达；Western Blot检测MDR1编码的P糖蛋白(P-gp)的表达水平。结果SGC-7901/5-FU对5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数分别为6.26、3.71、5.25。与亲代细胞相比,SGC-7901/5-FU细胞增殖速率及细胞倍增时间显著变缓(细胞倍增时间：30.82±1.46h vs46.01±4.15h,P<0.05)；耐药子株S期细胞显著减少,G0/G1期细胞则显著增高(P<0.01)；而G2/M期细胞无显著差异(P>0.05)。MDR-1、MRP-6、DAPK-3和P-gp表达显著上调(SGC-7901表达值分别为0.29、0.10、0.48、0.52；SGC-7901/5-FU则为0.54、0.52、1.29、1.64,P<0.01),而ERCC-1、caspase-3、P53、DAPK-1、 DAPK-2、Bcl-2的表达均无显著变化(P>0.05)。结论成功构建胃癌耐5-FU细胞株SGC-7901/5-FU,其对顺铂、环磷酰胺产生交叉耐药,耐药机制与MDR-1、MRP-6、DAPK-3及P-gP等有关。