NF-E2(Nuclear factor erythroid 2)，属于基本亮氨酸链状蛋白。是红系特异性转录因子。它由两个亚基组成，其中小亚基p18广泛大量表达于各种组织中，而大亚基p45则属于组织限定性蛋白，只在造血前体细胞，红系细胞、巨核细胞、粒细胞及嗜酸细胞中有所表达。NF-E2能够与血红蛋白珠蛋白基因局部控制区域(LCR)中的增强子序列相结合从而促进其转录，在红系分化中起到至关重要的作用。在p45NF-E2表达缺陷的红白血病细胞株中，血红蛋白的表达极大的减低甚至消失，而外源p45NF-E2的导入则能够使血红蛋白的表达恢复，说明NF-E2对血红蛋白的表达起决定性作用。但是在基因敲除小鼠中，却没有见到明显的贫血改变，说明体内有某种因子可能起到代偿作用。基因敲除的小鼠多因为外周血小板缺失而出血死亡。说明NF-E2对巨核细胞分化形成血小板至关重要。 编码小鼠p45NF-E2的基因位于友好病毒的一个常见的插入位点Fli-2区域。在友好病毒诱导产生的一些红白血病细胞系中，友好病毒的插入导致一条等位基因失活，同时在肿瘤的形成过程中，另一条等位基因丢失。提示NF-E2可能在红白血病的发生中起到抗癌基因的作用。当应用友好病毒注射p45NF-E2基因敲除杂合子小鼠诱导红白血病时，与野生型小鼠相比发病率升高，只有来源于杂合子的原发肿瘤能够建立细胞系，并且大部分细胞系的建立都伴有另一条等位基因的丢失而导致p45NF-E2的完全失活。进一步确定了NF-E2具有抗癌基因的功能。吉林人学博1学位论文 呼心 为了探讨NF一EZ抗肿瘤作用的机制，我们应用p45NF一EZ缺陷的红白血病细胞cB3和HB22.2作为细胞模型对其功能进行了研究。当外源P45NF一EZ基因在CB3和HB 22.2中得到表达后，在两种细胞中都获得了血红蛋白的表达。对肿瘤生长曲线的研究发现，在HB222细胞中，外源基因的表达极大地抑制了肿瘤细胞的生长。对细胞周期相关蛋白的研究表明，NF一EZ能够通过升高细胞周期素依赖的蛋白激酶(cDK)的抑制因子p27来发挥抗肿瘤作用。但CB3细胞中却没有见到抑制肿瘤细胞生长的作用，同样地也没有p27的改变，考虑可能是由于在CB3细胞中多种细胞缺陷，细胞环境相对不完整所致。为了证实NF一EZ的抑制肿瘤功能，我们对HB60一5进行诱导分化，随着诱导时间的延长，P45NF一EZ和血红蛋白的表达逐渐升高，同时也可以见到p27的逐渐增加。p27作为细胞周期抑制因子，能够对各种CDK进行抑制，但其主要的靶位则是抑制CDKZ的功能。反之，激活的CDKZ能够使p27第187位苏氨酸磷酸化，从而被泛素依赖的蛋白酶体降解。在细胞周期的进行中，cyclin Dl起到“开关”的作用，同时Cyclin Dl对p27的降解过程起到重要的作用。当细胞受到外来因素的刺激时，首先出现cyclin Dl的升高，而cyclin Dl与CDK4通过p27的组装作用而形成复合物，同时滞留了p27，阻止其与Cyclin E/CDKZ复合物的结合而发挥抑制CDKZ的功能。我们检测T转染外源P45NF一EZ的HB22.2细胞的Cyelin nl及CDK的改变，发现NF一EZ可以降低Cyclin Dl与CDKZ的蛋白水平，同时应用免疫沉淀的方法研究蛋白之间的相互作用表明P27与CDKZ的结合增多而发挥抑制作用。同样的在HB60一5诱导分化的细胞当中，也可以见到Cycin DI和CDKZ同样的改变。以上这些细胞周期相关蛋白的改变均发生在转录后水平。为了确定NF-EZ对细胞周期蛋白的调节是否依赖于红系细胞分化，我们将p45NF一E2基因转染到猴肾脏细胞cosl中，同样地得到了p27和cyclin Dl的改变，但是却没有CDKZ水平和活性的变化，说明NF一EZ对p27和Cyclin Dl的调节不需要勺/口了吉林人学搏尸尹位论文造血细胞环境，但是完全发挥抑制细胞周期的作用则需要红系细胞分化参与其中。 为了进一步寻求NF一EZ在红系造血调控中所发挥的作用，我们引用基因芯片技术对NF一EZ所调节的基因进行了检测。我们首先检测了14.5天小鼠胚胎肝脏中基因的变化，发现在p45NF一EZ基因敲除的小鼠胚胎肝脏中，与野生型对照组相比，没有血红蛋白表达的差异，Northem Blot检测也证明了这一点。从基因芯片的结果我们知道，在体内NF一EZ能够通过调节铁蛋白轻链1及timeless同源基因而发挥影响铁代谢和生物节律的功能。在转基因细胞的基因芯片检测中，我们发现NF一EZ能够上调G户a’A一1和EDRF基因，同时下调Fli一1基因。GATA一1是红系造血调控中的一个主要转录因子，能够抑制红系细胞的增殖和促进红细胞分化，Fli一1属于ets转录因子家族，主要在红系细胞中表达，在多种红白血病中，由于逆转录病毒的插入而持续激活。它能够促进红系细胞的增殖而抑制分化。作为红系相关因子，GAI’A一1和Fli一1具有相互抑制的作用。EDRF是近年来发现的一个红系相关基因，对血红蛋白珠蛋白链的稳定，减少细胞内沉淀而降低其细胞毒性至关重要。在诱导分化的HB60一5的细胞中，同样可以见到GATA一1和EDRF的上调和Fli一1的下调。而经过应用GAI人一1基因和Fli一1基因转染HB60一5细胞，发现GAEA一1可以上调EDRF而Fli一1可以使之下调。从而证实了NF一EZ是通过升高GAI’A一1和降低Fli一1进而加强EDRF的表达。 唾性r