担子菌Coprinopsis cinerea子实体生长发育的过程中,在极短的时间内菌柄迅速伸长生长,细胞壁发生重构。细胞壁重构的过程中既需要足够的刚性又需要足够的可塑性,保证细胞在扩张的过程中仍能维持细胞的形状。因此,研究真菌细胞壁重要成分,几丁质的水解酶,具有重要意义。几丁质水解酶主要包括两大类,断裂糖苷键的几丁质酶和脱去几丁质乙酰基的几丁质脱乙酰基酶。本文分别各研究了一个,初步探索其酶学性质,为研究真菌细胞壁的扩张机制提供基础。本研究利用实验室保存的Cda3真核表达菌株,成功获得了几丁质脱乙酰基酶Cda3。来自C.cinerea的几丁质脱乙酰基酶Cda3可以作用于聚合度（dp）≥2的几丁质寡糖。由于Cda3首先脱去（Glc NAc）₄内部的乙酰基,因此这是一个内切几丁质脱乙酰基酶。不同于过去报道的脱乙酰基酶的脱乙酰基模式,Cda3既可以在（Glc NAc）₂的还原端,又可以在非还原端脱去一个乙酰基;Cda3可以在（Glc NAc）₃的任意位点包括中间和两端,脱去乙酰基;Cda3脱去（Glc NAc）₄内部的一个乙酰基后,可以进一步在任意位点,包括（Glc NAc）₄的中间、还原端和非还原端脱去乙酰基。3D结构分析显示,Cda3在催化活性位点的-1和+1位点都具有较多的芳香族氨基酸,这可能是Cda3具有如此特殊的脱乙酰基模式的原因。进一步研究其酶学性质,Cda3可以作用于微晶体几丁质类底物,其脱乙酰基活性随着几丁质类底物乙酰度（DA）的降低而增加,并且对C.cinerea菌柄基部细胞壁有较高的活性,菌柄基部细胞壁Glc N/Glc NAc的摩尔比高于菌柄顶部细胞壁。Cda3具有独特的脱乙酰基模式和酶学性质,在C.cinerea子实体成熟过程中有重要的作用,并且可能在利用担子菌菌糠制备壳聚糖,应用于食品、化妆品、药学领域等具有重要的潜在价值。为了获得几丁质酶Chi E2,构建了Chi E2的重组表达菌株,虽然未获得纯的Chi E2蛋白,但是通过液质联用的方法证明了发酵液中确实包含重组蛋白Chi E2。通过简单的盐析沉淀的方法浓缩发酵液中的Chi E2蛋白,检测其底物特异性,发现Chi E2对不溶的几丁质粉末没有水解活性。3D结构分析发现在Chi E2的底物结合沟槽附近有一个凸起结构,可能阻碍不溶性底物与Chi E2的结合。Chi E2在C.cinerea子实体伸长生长过程中不起主要作用。