目的:初步分析野生型斑马鱼中brd4基因的时空表达情况。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立的可稳定遗传的brd4基因靶向敲除的斑马鱼突变体来探讨brd4基因在斑马鱼胚胎髓系造血分化中的作用。同时,利用BRD4蛋白的特异性小分子抑制剂JQ1处理野生型斑马鱼胚胎以进一步验证brd4基因的作用,为理解brd4基因在造血发育及调控中的作用提供理论依据。方法:（1）基于斑马鱼brd4 mRNA CDS编码区设计并构建合成反义的RNA探针,运用整胚原位杂交实验技术（WISH）和RT-PCR分析brd4基因在野生型斑马鱼体内的时空表达。（2）通过提取斑马鱼的基因组DNA和RNA、PCR扩增、基因测序和RT-PCR等多种方法鉴定brd4基因敲除斑马鱼突变体。（3）使用小分子抑制剂JQ1处理野生型斑马鱼胚胎,进一步验证brd4在髓系分化中的作用。（4）通过苏丹黑B染色实验检测成熟中性粒细胞的数量和分布。（5）通过中性红活体染色实验检测巨噬细胞的数量和分布。（6）利用整胚原位杂交（WISH）实验检测髓系造血特异性标记基因mpx、lyz、l-plastin、mfap4的时空表达水平。结果:（1）成功构建brd4 mRNA分子探针,brd4基因为母系遗传,早期呈广泛和非特异性地表达;（2）与野生型和杂合突变斑马鱼相比,brd4^-/-斑马鱼通常在13dpf左右死亡,存活率的下降表明brd4基因在斑马鱼生长发育方面发挥了关键的作用;（3）通过T7转录酶体外转录cDNA,成功制备了斑马鱼粒系、单核巨噬系分化标记基因的反义RNA探针,且具有良好的特异性;（4）苏丹黑B染色（SBB）检测到brd4^-/-的成熟中性粒细胞数量上的显著减少,而中性红活体染色实验检测到brd4^-/-的巨噬细胞数目与野生型斑马鱼相比无明显差异;（5）整胚原位杂交（WISH）检测brd4^-/-斑马鱼的粒系相关基因mpx、lyz的表达水平与野生型斑马鱼相比明显下调,而单核系基因l-plastin、mfap4的表达水平无明显差异。（6）JQ1小分子抑制剂处理后的WT斑马鱼的表型分析结果与以上结果一致。结论:敲除brd4基因和JQ1药物持续处理后均导致斑马鱼中性粒细胞的分化发育阻滞和数量上的明显减少而不影响单核巨噬细胞的分化发育,提示brd4基因对正常粒细胞造血分化至关重要,其具体详尽的分子调控机制及功能尚需进一步研究。